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- 2025年07月15日
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文献和实验liteng1117 求助: 构建好了重组腺病毒进行蛋白表达，分子量是14kd，5%的浓缩胶70v，12%，或15%的分离胶110v，跑90min。湿转：100v，90min。封闭用5%的脱脂奶粉，封闭3h（因为背景深，以为封闭久会好些）。一抗1:3000，4度过夜，二抗1:5000，孵育1h，洗膜都是用TBST漂洗15min ×4次。但是显影后背景特别深，虽然可以看见目的条带，但还是有一些非特异性的条带出现，不知道是封闭出问题还是一抗浓度过高。
【求助】180KD的膜蛋白western转膜条件怎样？（湿转）
zhywang4072 鄙人现在做一180KD的蛋白，之前转PVDF膜用的是100v两个半小时，预染marker转得很漂亮，内参也很不错，但是目标蛋白条带却没有，请教各位大侠，这是什么原因？还有诸位大蛋白转膜时候条件怎样？我用的是湿转，谢谢 wodezxn 我觉得100V2h肯定是足够了，没转上应该是你目的蛋白的问题，可能是蛋白表达量太少或者你提蛋白的时间有问题。 zhibinx2007
lilililiwoody 比如我查的资料D-丝氨酸的分子量是105.09，白介素-1的分子量是17KD，载脂蛋白E的分子量是34145D，它们的单位不同，我怎么比较它们的分子量大小？谢谢各位大侠，***了！ woxingwosu D：dalton KD: kilodoltons, = 1000 D,是D的一千倍 lilililiwoody 谢谢版主！ 本文由丁香
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