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- Thermo scientific -fermentas
- ER0661
- 2025年10月06日
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大量
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS |
| 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER0661 | 1200 u (10 u/µl) | 1.00 ml | ER0661 | |
| ER0662 | 5 x 1200 u (10 u/µl) | 2 x 1.00 ml | ER0662 | |
| ER0663 | HC, 6000 u (50 u/µl) | 2 x 1.00 ml | ER0663 | |
| ER0667 | 500 u (10 u/µl) | 1.00 ml |
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| Tango™ | 30°C | 50-100 | 0-20 | 0-20 | 0-20 | 100 | 0-20 | 1X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
3 切割位点
33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
30°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
备注
- 37°C酶切时只有50%的酶活性。 37°C的半衰期只有15分钟。
- 25°C酶切时只有100%的酶活性。
- SmaI酶切需K+ 离子存在。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 完全重叠 – 阻止酶切。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| CpG | CCCGGG |
阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 50-100 | ||||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 3 | 0 | 1 | 0 | 1 | 1 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 0 |
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文献和实验The Minion Lab, College of Veterinary Medicine at Iowa State University http://mycoplasmas.vm.iastate.edu/lab_site/methods/DNA/SmaIvector.html
Methylation analyis using restriction enzyme digestion
. Since in eukaryotic DNA (or actually in mammalian DNA) only cytosine in CG context can be methylated, the restriction enzymes with CG sequences within their restriction sites come in question. Two classical enzyme pairs are HpaII - MspI (CCGG) and SmaI - XmaI (CCCGGG
。 由此题我发现，目的基因由两种限制酶切割，一端由EcoRI切出黏性末端，另一端由AluI切出平末端;载体质粒由两种限制酶切开，一端由EcoRI切出黏性末端，另一端由SmaI切出平末端。在构成重组 质粒时，两个黏性末端碱基互补，由DNA连接酶可以连接上磷酸二酯键，这没有疑议。但是另一端两个平末端也能由DNA连接酶连接上，并且原题中第(3)问“图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求? 。”答案为“否”。 也就是由此题我们可以得出一个结论：DNA连接
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