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SduI (Bsp1286I)

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER0651
  • 2025年10月06日
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      大量

    • - FastDigest®限制酶
    • - 推荐的缓冲液 : Unique缓冲液
    • - 孵育温度37°C
    • - 连接效率95%
    • - 热失活65°C, 20 min
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer SduI
    ER0651 500 u (10 u/µl) 1.00 ml ER0651
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    SduI 37°C NR 50-100* 0-20 0-20 NR NR NR
    * –星活性比5倍过量酶切(5 units x 1 hour)还强。

    Lambda DNA
    0.7%琼脂糖
    38 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液SduI:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.2, 37°C), 3 mM MgCl2 , 150 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA。
    37°C酶切。

    保存缓冲液
    SduI保存在:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍SduI过量酶切后,超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。

    备注
    低盐、pH> 8.0、高浓度甘油(>5%)或过量酶切都会导致星活性。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    兼容性末端
    Alw21I, ApaI, BseSI, Eco24I, Mph1103I, PstI, SacI, SdaI。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 可能重叠 – 不影响。
    CpG: 可能重叠 – 不影响。
    EcoKI: 可能重叠 – 影响不确定。
    EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    Dcm (CCWGG)

    5'...Cm5CW GG GCCm5CW GG ...3'
    3'...G GWm5CC CGG GWm5CC ...5'

    不阻止酶切
    CpG

    5'...m5C G DGCHm5C G ...3'
    3'... Gm5C HCGD Gm5C ...5'

    不阻止酶切
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    38 3 5 10 5 6
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    5 6 6 6 4 8

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      做了点甲基化研究,从头下来,也有一点点体会。也看了院子里不少牛人的新的体会。本人将每一个步骤的具体操作、每个操作的具体注意事项和心得进行初步总结,慢慢叙来,抛砖引玉,欢迎拍砖。 做到现在,有成功的喜悦,也有失败痛苦,且行且歌,总得来说,BSP/MSP,想说爱你不容易。 如有时间,想谈谈:BSP/MSP引物设计;基因组海量甲基化数据分析;MSP设计及操作;当前MSP的研究进展,等等吧…… 1.  确定目的基因后,登陆一下网址:http://genome.ucsc.edu

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