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PagI (BspHI)

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER1281
  • 2025年10月03日
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    • - FastDigest®限制酶
    • - 推荐的缓冲液 : O
    • - 孵育温度37°C
    • - 连接效率95%
    • - Dam甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - 热失活80°C, 20 min
    • - 基因组级别
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer O
    ER1281 400 u (10 u/µl) 1.00 ml ER1281
    ER1282 2000 u (10 u/µl) 1.00 ml ER1282
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    O 37°C 0-20 50-100 100 NR NR NR NR

    Lambda DNA
    0.7%琼脂糖
    3 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液O:
    50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA。
    37°C酶切。

    保存缓冲液
    PagI保存在:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍PagI过量酶切后,超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。

    琼脂糖包埋DNA酶切
    至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。

    备注
    • 低盐、pH> 8.0、高浓度甘油(>5%)或过量酶切都会导致星活性。
    • 重叠的Dam甲基化影响PagI酶切。为了避免Dam甲基化的影响,样本DNA需要从dam-, dcm-

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    兼容性末端
    AflIII, PscI, DsaI, Eco130I, NcoI。

    甲基化影响
    Dam: 可能重叠 – 部分影响。
    Dcm: 无重叠 – 不影响。
    CpG: 无重叠 – 不影响。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 可能重叠 – 部分影响。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    Dam (GATC)

    5'...TCATGm6A TC ...3'
    3'...AGTAC Tm6AG ...5'

    部分影响
    Dam (GATC)

    5'...Gm6A TC ATGm6A TC ...3'
    3'...C Tm6AG TAC Tm6AG ...5'

    影响不确定
    EcoBI (TGA(N)8 TGCT)

    5'...TCATGm6A(N)8 TGCT...3'
    3'...AGTAC T(N)8 m6ACGA...5'

    部分影响
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    20-50 50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    8 3 1 4 3 3
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    2 2 2 2 4 1

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