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- Thermo scientific -fermentas
- FD0624
- 2025年09月30日
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X FastDigest® Buffer | 10X FastDigest® Green Buffer | ||||
| FD0624 | 20 µl (20 react.) | 1.00 ml | 1.00 ml | FD0624 | |
| Reaction temperature | Digestion time with 1µl of FastDigest® enzyme, min | bp from end of DNA required for complete digestion | Thermal inactivation | Incubation time without star activity, hours | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Lambda, 1µg/20µl | Plasmid DNA, 1µg/20µl | PCR product, ~0.2µg/30µl | Genomic DNA, 1µg/10µl | ||||
| 37°C | 5 | 15 | 5 | 5 | 4 | 80°C, 5 min | 16 |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
3 切割位点
1 µl FastDigest® PvuI可在
– 5分钟内酶切1 µg lambda DNA/CpoI片段;
– 15分钟内酶切1 µg质粒DNA;
– 5分钟内酶切0.2 µg PCR扩增产物;
– 5分钟内酶切1 µg基因组DNA或30分钟内酶切5 µg基因组DNA。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 完全重叠 – 阻止酶切。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dam (GATC) | CGm6ATC G |
不阻止酶切 |
| CpG | CGATCG |
阻止酶切 |
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 3 | 0 | 1 | 1 | 2 | 2 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 0 |
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文献和实验体。 pGEM®-TEasy载体的多克隆位点区含有一些这样的限制性酶切位点，采用这些酶进行单酶切消化即可释放插入片段。如pGEM®-TEasy载体多克隆区的EcoRⅠ、BstZⅠ和NotⅠ酶切位点。这种载体也可选用适当的双酶切消化释放插入片段。 pGEM®-TEasy载体含有丝状噬菌体f1复制起始子，可用于制备单链DNA(ssDNA参见第Ⅶ部分)。单链DNA分子对应于图1底部一条链，代表pGEM®-TEasy载体。 pGEM®-TEasy载体系统包含2×快速连接缓冲液，用于连接PCR产物。采用这种
,16236,17395, 19838,20286,22426,26933,32010,32257,37006 片段长度: 11497,5077,4749,4507,2838,2560,2459,2443,2140,1986,1700, 1159,1093,805,514,468,448,339,264,247,216,211,200,164, 150,94,87,72,15 PvuI
， PvuI ， SacI ， SacII ， SalI ， ScaI ， SmaI ， SpeI ， SphI ， StuI ， XbaI ， XhoI ， XmaI ，为什么要添加保护碱基？在分子克隆实验中，有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点，用于后续的酶切和连接反应。由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计 PCR 引物时，人为的在酶切位点序列的 5‘ 端外侧添加额外的碱基序列，即保护
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