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Cfr42I (SacII)

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER0201
  • 2025年09月23日
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      大量

    • - 推荐的缓冲液 : B
    • - 孵育温度37°C
    • - 连接效率95%
    • - CpG甲基化可能影响DNA切割
    • - 热失活65°C, 20 min
    • - 基因组级别
    • - 重组酶
    • - 蓝/白鉴定
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer B 10X Buffer Tango™
    ER0201 1200 u (10 u/µl) 1.00 ml 1.00 ml ER0201
    ER0202 5 x 1200 u (10 u/µl) 2 x 1.00 ml 1.00 ml ER0202
    ER0205 2000 u (10 u/µl) 1.00 ml 1.00 ml ER0205
    ER0207 400 u (10 u/µl) 1.00 ml 1.00 ml ER0207
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    B 37°C 100 50-100 0-20 0-20 50-100 0-20 1X

    Lambda DNA
    0.7%琼脂糖
    4 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液B:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 0.1 mg/ml BSA。
    37°C酶切。

    保存缓冲液
    Cfr42I保存在:
    10 mM磷酸钾 (pH 7.4, 25°C), 100 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍Cfr42I过量酶切后,超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。

    琼脂糖包埋DNA酶切
    至少需要20 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。

    备注
    • Cfr42I很难切割λ DNA的某些位点,其原型酶SacII也是如此。其有效酶切至少需要两个Cfr42I的识别位点。
    • 高盐浓度影响Cfr42I酶活性。底物DNA中痕量的NaCl残留抑制酶活性,从而导致部分酶切。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    兼容性末端
    Bsh1285I。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 无重叠 – 不影响。
    CpG: 完全重叠 – 阻止酶切。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 无重叠 – 不影响。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    CpG

    CCGCGG

    阻止酶切
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    4 1 0 0 0 0
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    0 0 1 1 1 1

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