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- Thermo scientific -fermentas
- ER1711
- 2025年09月19日
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- 技术资料
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大量
|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer O | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER1711 | 2000 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1711 | |
Reaction conditions
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| O | 65°C | NR | 100* | 100 | NR | NR | 100* | 2X* |
* –星活性比5倍过量酶切(5 units x 1 hour)还强。
Lambda DNA
1.0%琼脂糖
21 切割位点
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液O：
50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA。
65°C酶切。为确保高效酶切，反应体系中加入石蜡油防止蒸发。
50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA。
65°C酶切。为确保高效酶切，反应体系中加入石蜡油防止蒸发。
保存缓冲液
BseJI保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
连接和重新酶切
50倍BseDI过量酶切后，超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。
备注
- 37°C酶切时的酶活性低于10% 。
- 超过20倍过量酶切会导致星活性。
- 重叠的Dam甲基化抑制BseJI酶切。为了避免Dam甲基化的影响，样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提，如GM2163 (#M0099)。
商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。
双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。
甲基化影响
Dam: 可能重叠 – 阻止酶切。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dam (GATC) | 5'...Gm6A TC (N)3 ATC...3' |
阻止酶切 |
| CpG | 5'...GAT(N)4 ATm5C G ...3' |
不阻止酶切 |
| CpG | 5'...m5C G AT(N)4 ATm5C G ...3' |
影响不确定 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 0 | 50-100 | |||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 21 | 2 | 2 | 1 | 0 | 0 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 |
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