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- Thermo scientific -fermentas
- K0181
- 2025年10月13日
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- 技术资料
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | ||||
| 10X Long PCR Buffer | 10X Long PCR Buffer with 15 mM MgCl2 | 25 mM MgCl2 | DMSO | Water, nuclease-free | ||||
| K0181 | 100 u (5 u/µl) | 0.60 ml | 0.60 ml | 0.60 ml | 0.30 ml | 1.50 ml | K0181 | |
| K0182 | 500 u (5 u/µl) | 2 x 1.25 ml | 2 x 1.25 ml | 2 x 1.25 ml | 1.00 ml | 1.50 ml | K0182 | |
- Features
-
- 两种热稳定性DNA polymerases的特殊混合物。
- 长片段PCR产物：
一 病毒DNA模板：47 kb产物；
一 基因组DNA模板：21 kb产物。 - 适合GC-rich(最高达85%)的模板。
- 保真性比Taq DNA polymerase高3倍(见图1)。
- 产量高。
- Applications
-
- 长片段PCR 。
- GC-rich或困难模板的PCR。
- 制备TA克隆用PCR产物。
- RT-PCR。
说明
Long PCR Enzyme Mix是由Fermentas Taq DNA Polymerase和一种具有校正活性的热稳定DNA polymerase的独特混合物。两种酶协同作用扩增长片段PCR产物。扩增产量和保真性比单独使用Taq DNA Polymerase高。该混合物扩增的保真性比Taq DNA Polymerase高3倍。两种酶的比例经优化处理，可合成超长的片段(47 kb：病毒DNA 模板；21 kb：基因组DNA模板) (见图1)。特殊的Long PCR Buffer 保护DNA 在长时间热循环时不会脱嘌呤或产生缺口。绝大部分扩增产物具有3’-dA突出末端。
Long PCR Enzyme Mix可高效扩增GC-rich的DNA 序列(见图2)。
质量控制
功能测试：以Lambda DNA为模板扩增长达47.4 kb的片段。
图1。长片段DNA模板扩增。
2.5 u Long PCR Enzyme Mix扩增DNA片段(1.25 ng lambda DNA模板；50 μl反应体系)。
M – Lambda Mix Marker
1-5 – PCR 产物
2.5 u Long PCR Enzyme Mix扩增DNA片段(1.25 ng lambda DNA模板；50 μl反应体系)。
M – Lambda Mix Marker
1-5 – PCR 产物
图2。Long PCR Enzyme Mix 成功扩增GC-rich模板。
Long PCR Enzyme Mix和其它两个厂家的GC-rich模板专用PCR系统扩增人的IGFR II 基因(85% GC 含量)。50 μl 反应体系包括： 100 ng人基因组DNA, 200 μM各种dNTP 和0.5 μM各种引物。循环条件如下：94°C, 2 min; 96°C, 10 s; 68°C, 1 min 30 s; 35 cycles; 72°C, 7 min。
M – GeneRuler™ 100 bp Plus DNA Ladder
1 – Long PCR Enzyme Mix，添加12% DMSO
2-3 – 其它厂商的GC-rich模板专用PCR体系
Long PCR Enzyme Mix和其它两个厂家的GC-rich模板专用PCR系统扩增人的IGFR II 基因(85% GC 含量)。50 μl 反应体系包括： 100 ng人基因组DNA, 200 μM各种dNTP 和0.5 μM各种引物。循环条件如下：94°C, 2 min; 96°C, 10 s; 68°C, 1 min 30 s; 35 cycles; 72°C, 7 min。
M – GeneRuler™ 100 bp Plus DNA Ladder
1 – Long PCR Enzyme Mix，添加12% DMSO
2-3 – 其它厂商的GC-rich模板专用PCR体系
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