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Long PCR Enzyme Mix

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  • Thermo scientific -fermentas
  • K0181
  • 2025年10月13日
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    • - -20°C保存
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Long PCR Buffer 10X Long PCR Buffer with 15 mM MgCl2 25 mM MgCl2 DMSO Water, nuclease-free
    K0181 100 u (5 u/µl) 0.60 ml 0.60 ml 0.60 ml 0.30 ml 1.50 ml K0181
    K0182 500 u (5 u/µl) 2 x 1.25 ml 2 x 1.25 ml 2 x 1.25 ml 1.00 ml 1.50 ml K0182
    Features

    • 两种热稳定性DNA polymerases的特殊混合物。
    • 长片段PCR产物:
      一 病毒DNA模板:47 kb产物;
      一 基因组DNA模板:21 kb产物。
    • 适合GC-rich(最高达85%)的模板。
    • 保真性比Taq DNA polymerase高3倍(见图1)。
    • 产量高。
    Applications

    • 长片段PCR 。
    • GC-rich或困难模板的PCR。
    • 制备TA克隆用PCR产物。
    • RT-PCR。
    说明
    Long PCR Enzyme Mix是由Fermentas Taq DNA Polymerase和一种具有校正活性的热稳定DNA polymerase的独特混合物。两种酶协同作用扩增长片段PCR产物。扩增产量和保真性比单独使用Taq DNA Polymerase高。该混合物扩增的保真性比Taq DNA Polymerase高3倍。两种酶的比例经优化处理,可合成超长的片段(47 kb:病毒DNA 模板;21 kb:基因组DNA模板) (见图1)。特殊的Long PCR Buffer 保护DNA 在长时间热循环时不会脱嘌呤或产生缺口。绝大部分扩增产物具有3’-dA突出末端。

    Long PCR Enzyme Mix可高效扩增GC-rich的DNA 序列(见图2)。


    质量控制
    功能测试:以Lambda DNA为模板扩增长达47.4 kb的片段。


    图1。长片段DNA模板扩增。
    2.5 u Long PCR Enzyme Mix扩增DNA片段(1.25 ng lambda DNA模板;50 μl反应体系)。
    M – Lambda Mix Marker
    1-5 – PCR 产物
    图2。Long PCR Enzyme Mix 成功扩增GC-rich模板。
    Long PCR Enzyme Mix和其它两个厂家的GC-rich模板专用PCR系统扩增人的IGFR II 基因(85% GC 含量)。50 μl 反应体系包括: 100 ng人基因组DNA, 200 μM各种dNTP 和0.5 μM各种引物。循环条件如下:94°C, 2 min; 96°C, 10 s; 68°C, 1 min 30 s; 35 cycles; 72°C, 7 min。
    M – GeneRuler™ 100 bp Plus DNA Ladder
    1 – Long PCR Enzyme Mix,添加12% DMSO
    2-3 – 其它厂商的GC-rich模板专用PCR体系

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