免疫共沉淀Co-IP

Co-IP是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质功能的实验方法。Co-IP是在IP的基础上衍生出来的实验方法，是证明蛋白相互作用的金标准。通过检测免疫沉淀下来的蛋白复合物来证实中是否存在与X蛋白相互作用的Y蛋白。其基本原理是，在细胞裂解液中加入抗X蛋白的抗体，孵育后再加入与抗体FC片段特异结合的Protein A/G-琼脂糖微珠，若细胞中有与Y结合的X蛋白，就可以形成这样一种复合物： Y—X—抗X抗体—Protein A或G ，经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，复合物又被分开。然后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。

客户需要注意的是Co-IP方法可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；同时如果检测到有相互作用并不能完整表明生理状态下共定位，此外检测到的两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；最后必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有一定风险,另外客户可以选择Co-IP得到的样品利用质谱进行后续分析.


服务流程图

实验结果

使用protein X的抗体进行免疫沉淀(IP), 以IgG为阴性对照。可以看到, 沉淀后的产物中用protein X的抗体可以检测到条带，而IgG组不能沉淀到protein X。IP过程对protein X起到了纯化和富集的作用。而使用protein Y的抗体检测沉淀产物也可以检测到条带，结果证明，protein Y和protein X具有相互作用(co-IP)。