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免疫沉淀IP
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文献和实验了一线技术支持常被问到的问题,希望这篇纯干货能帮助大家顺利升级打怪,早日驾驭 IP、co-IP。 IP、co-IP、pull-down 简介 IP(Immunoprecipitation),免疫沉淀:是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等基质上的特异性抗体对抗原进行小型亲和纯化的一种方法 Co-IP(co-Immunoprecipitation),免疫共沉淀: co-IP 是一种常用的鉴定蛋白-蛋白相互作用的方法,其基本实验流程和IP类似,通过使用诱饵蛋白(IP 中的抗原,bait protein)特异
有适合免疫沉淀IP的GST抗体吗? 近年来在原核表达体系中,谷胱甘肽S转移酶GST表达纯化系统的应用更为普遍,它的来源是日本血吸虫的25kDa大小的GST蛋白。GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便,以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可从细菌裂解液中提取,在不变性的条件下通过亲和层析得到。GST融合蛋白可被位点特异性蛋白酶裂解,从而除去GST蛋白。正是由于以上的优点,商品化的GST融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛
紫叶竹韵 做IP,之后Western 分析,看到有两条带,在25和50KD左右,应该是抗体的两条带,但是我的目的蛋白也是52KD的,这该怎么区分呢。 woxingwosu 最好是选择与做IP不同来源的抗体来做(比如说IP用鼠的抗体,WB就用兔的抗体),这样就不会检测到抗体的两条带。 如果没有不同来源的抗体的话,就要做IP的时候尽量少放点抗体,跑胶跑得远一点,使得目的蛋白能够被看到,不过由于你的蛋白是在是太接近重链
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