CRISPR/Cas9

CRISPR/Cas9技术简介
CRISPR/Cas系统是存在大多数细菌（40%）和古细菌（90%）中的一种天然免疫系统，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。CRISPR指的是规律成簇的间隔短回文重复（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）。
CRISPR/Cas9技术运用指南
1、确定实验目的
A、基因敲除
单gRNACas9系统（NHEJ造成蛋白编码基因Indel移码突变）
双gRNACas9系统（造成关键外显子、miRNA或lncRNA因片段缺失）
单gRNACas9系统（造成基因组断裂，诱导同源修复机制）+Donor载体（用于同源修复，两边带有同源臂，中间带真核抗性基因，方便阳性筛选）
B、基因敲入
单gRNACas9系统（造成基因组断裂，诱导同源修复机制）+Donor载体（用于同源修复，两边带有同源臂，中间带过表基因原件及真核抗性基因）
C、基因修饰/突变
单gRNACas9系统（造成基因组断裂，诱导同源修复机制）+ssDNA/Donor载体（用于同源修复，造成基因组点突变或插入修饰片段）
D、基因转录激活
gRNA dCas9-VP64系统（gRNA dCas9识别基因转录启动子区，VP64激活基因转录）
2、确定所要编辑的细胞或物种
A、脂质体易转染细胞
使用质粒系统
体外转录gRNA+Cas9 mRNA/Cas9蛋白
B、脂质体难转染细胞
使用质粒系统电转化、借助慢病毒、腺病毒或腺相关病毒系统介导gRNACas9的导入
C、斑马鱼、小鼠或大鼠
显微注射导入体外转录gRNA和Cas9 mRNA/ Cas9蛋白及Donor
CRISPR/Cas9基因编辑技术服务项目及报价

服务项目	完成周期	收费标准	备注
CrRNA化学合成	7个工作日	1000元/条	提供2OD
TracrRNA体外转录	7个工作日	2500元/条	提供100ug
gRNA体外转录	15个工作日	2500元/条	提供100ug
单gRNA/gRNA Cas9载体构建	7个工作日	1000元/个	提供质粒20-50ug
双gRNA Cas9载体构建	14个工作日	2600元/个	提供质粒20-50ug
基因表达激活gRNA dCas9-VP64载体构建	7个工作日	1000元/个	提供质粒20-50ug
Donor DNA载体构建	30-60个工作日	3-5元/bp+1000元	Donor载体用于同源重组，提供质粒20-50ug；特殊序列需另外计费
Knockin载体构建	30-60个工作日	3-5元/bp+1000元	Knockin载体用于基因定点敲入，提供质粒20-50ug；特殊序列需另外计费
各物种Cas9编码序列优化及构建，gRNA表达载体构建	30-60个工作日	3-5元/bp+1000元	根据客户要求设计并构建相关载体，提供质粒20-50ug；特殊序列需另外计费
T7-gRNA ，Sp6-gRNA载体构建	7个工作日	1000元/个	用于体外转录gRNA，提供质粒20-50ug
T7-Cas9，SP6-Cas9载体	3个工作日	500元/个	用于体外转录Cas9，提供质粒20-50ug
Cas9 mRNA/Cas9蛋白	7个工作日	2500元	转录产物可用于转染、细胞显微注射等
gRNA Cas9/dCas9-VP64慢病毒载体构建及病毒包装服务	30-60个工作日	6000-10000元/株	提供10的7次方到8次方TU病毒
gRNA Cas9腺病毒/腺相关病毒载体构建及病毒包装服务	30-60个工作日	6000-10000元/株	提供10的8次方到9次方TU病毒
突变效率T7E1检测及测序	15个工作日	3500元/个	检测细胞内gRNA Cas9诱导基因突变效率
Cas9 稳定表达细胞株	3个工作日	5000元/株	提供25T细胞瓶
基因敲除/修饰稳定细胞株	3-6个月	30000元/株	要求细胞系增值能力强
gRNA Cas9载体快速构建试剂盒	3个工作日	1000元/（10次）	提供各种gRNACas9载体快速构建试剂盒
T7E1 突变检测试剂盒	3个工作日	600元/（50次）	提供T7E1及突变阴性及阳性对照DNA
gRNA Cas9剪切效率体外检测试剂盒	3个工作日	详细价格请咨询	体外切割效率检测
基因敲除/修饰小鼠/大鼠	4-9个月	详细价格请咨询
gRNA dCas9相关载体构建及后续服务		详细价格请咨询	可实现特定基因过表达，基因干扰，染色体染色及纯化特定基因组片段等目的