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RNA合成(单链RNA合成、双
链RNA合成、RNA修饰及标记、siRNA、miRNA mimics合成)RNA合成
武汉金开瑞生物工程有限公司
RNA合成是指在体外通过化学合成方法合成RNA分子的过程,通常采用无机化学方法合成磷酸二酯键,将核苷酸逐个连接成RNA链。RNA合成是一项重要的生物技术手段,可以用于研究RNA分子的结构、功能、调控机制等方面。合成的RNA分子可以用于体外转录、RNA交互、RNA稳定性研究、RNA纯化等方面的研究。RNA合成技术已经发展成为一种高效、快速的合成RNA的方法,为RNA生物学和基因工程研究提供了有力支持。
金开瑞RNA合成服务内容包括:单链RNA合成、双链RNA合成、RNA修饰及标记、siRNA、miRNA mimics合成等。为保证RNA oligo高质量,合成RNA均经MALDI-TOF质谱鉴定 (matrix-assisted laser desorption ionization-time-offlight),并严格执行QC标准,并通过HPLC对产物RNA进行纯度分析,保证最终发到客户手中的RNA质量。
RNA序列或者需要设计的基因名称和基因序列及要求。
产品名称 | 合成量(OD) |
普通siRNA oligos | 2 |
4 | |
5 | |
>5 | |
普通siRNA 三保一套餐 | 2 |
普通siRNA 四保一套餐 | 2 |
miRNA mimics 双链 | 2 |
miRNA mimics NC | 2 |
miRNA inhibitors | 2 |
单链RNA(<70nt) | 2 |
>2 | |
通用阴性对照siRNA | 1 |
FAM标记通用阴性对照siRNA | 1 |
阳性siRNA,GAPDH | 1 |
标记RNA oligos | 2 |
4 |
1、RNA合成方法
①化学合成法:
● 化学合成法是通过将核苷酸单元逐个连接起来合成RNA的方法。这种方法通常使用有机合成化学方法,如固相合成或液相合成。
● 在固相合成中,RNA链是在具有固定的核苷酸单元的合成支持上逐步构建的。每个核苷酸单元都具有保护基团,防止不需要的反应发生。核苷酸单元的添加通过去保护和活化步骤完成。
● 在液相合成中,核苷酸单元通过液相反应逐渐连接起来。这种方法通常用于较短的RNA片段的合成。
②体外转录法:
● 体外转录法利用体外转录系统合成RNA。这种方法通常使用DNA模板和RNA聚合酶来合成RNA。
● 在体外转录中,DNA模板需要包含适当的启动子序列,以使RNA聚合酶能够识别和启动转录。通过加入核苷酸三磷酸(NTPs)和其他必要的辅助物质,体外转录系统可以合成RNA。
● 体外转录法可以使用细胞提取物或重组的RNA聚合酶进行。
③基于RNA酶的合成法:
● 基于RNA酶的合成法利用RNA酶的催化活性合成RNA。这种方法通常使用类似于体外转录的原理,但使用RNA酶代替RNA聚合酶。
● RNA酶可以选择性地切割或连接RNA链的特定位置,从而合成特定的RNA序列。
2、在RNA合成中需要特别注意的点
● 模板设计和优化:选择合适的DNA模板是体外转录或化学合成的关键。确保模板具有适当的启动子序列、适当的长度和正确的目标序列。
● 高质量的起始材料:使用高质量的核苷酸单体、试剂和酶是确保合成RNA的成功的重要因素。确保使用新鲜、纯净和高质量的材料,避免使用过期或受污染的试剂。
● 脱保护步骤:对于化学合成方法,合成的RNA链通常会在核苷酸单元上有保护基团。脱除这些保护基团是合成成功的关键步骤,通常需要严格控制反应条件和使用适当的脱保护试剂。
● RNA纯化和质量控制:合成的RNA可能会包含未反应的试剂、副产物或其他污染物。因此,在合成完成后,需要进行适当的纯化步骤来去除这些杂质。此外,通过凝胶电泳、质谱分析等方法对RNA进行质量检查和验证,以确保所得到的RNA是纯净且具有所需的序列。
● RNA的稳定性:由于RNA易于降解,合成的RNA需要储存在适当的条件下,如低温和干燥环境中。使用RNase抑制剂和适当的储存缓冲液可以增加RNA的稳定性。
● 注意反应条件:在体外转录或化学合成过程中,确保适当的反应温度、时间和缓冲条件。反应条件的优化可能需要针对特定的RNA序列和合成方法进行调整。
● 防止RNA降解:在RNA合成和处理过程中,需要小心避免RNA受到RNase的污染。使用RNase-free的试剂和实验器材,并在操作过程中采取严格的无菌技术,以防止RNA的降解。
3、不同类型RNA的应用
RNA类型 | 概念 | 应用 |
普通RNA | 在细胞中参与蛋白质合成的传递遗传信息的RNA分子。 | - 基因表达研究:作为mRNA分子,在细胞中被翻译为蛋白质。 |
- 基因功能分析:通过干扰或增强RNA表达,研究基因在生理过程中的作用。 | ||
siRNA | 小干扰RNA,长度约为20-25个核苷酸,可通过RNA干扰技术靶向抑制基因表达。 | - 基因沉默:通过结合RISC复合体,靶向降解特定mRNA,抑制基因表达。 |
- 肿瘤治疗:设计特异性siRNA靶向抑制肿瘤相关基因,达到治疗肿瘤的目的。 | ||
miRNA | 微小非编码RNA,调控基因表达的调节子,长度约为20-25个核苷酸。 | - 抗病毒研究:抑制病毒复制和感染,研究抗病毒机制和开发抗病毒治疗方法。 |
- 基因表达调控:与mRNA互作,通过诱导降解或抑制翻译调控基因表达。 | ||
- 发育调控:参与胚胎发育、细胞分化以及生物体的生长和发育过程。 | ||
修饰RNA | 经过化学修饰的RNA分子,具有增强稳定性或改变功能的特性。 | - 疾病研究:研究miRNA与疾病发生、进展以及治疗潜力之间的关联 |
- 抗病毒研究:改变RNA分子的结构和稳定性,用于抗病毒药物的研发。 | ||
- RNA疫苗:修饰RNA作为疫苗载体,用于激发免疫反应以预防疾病 | ||
sgRNA | 单导RNA,用于CRISPR-Cas9基因编辑技术中的靶向DNA序列的引导RNA。 | - 基因编辑:与Cas9蛋白结合,引导Cas9蛋白靶向特定DNA序列 |
ASO | 寡核苷酸序列,具有特定序列和结构,用于靶向调控RNA的表达或功能。 | - 基因沉默:通过与RNA靶点结合,抑制或调控特定RNA的表达。 |
- 遗传疾病治疗:针对某些遗传性疾病中的突变基因进行精准调控和治疗。 | ||
- RNA稳定性调控:通过结合RNA分子,增强或降低其稳定性来调节RNA功能。 |
武汉金开瑞生物工程有限公司是一家专业致力于为全球制药企业、诊断试剂企业、科研试剂研发企业、高校和科研院所以及大型医院提供蛋白及相关研究技术服务的高新技术企业。金开瑞极其注重平台技术提升,现已有多项自主知识产权和软件著作权专利,并已通过ISO9001质量管理体系认证,2018获批“千企万人”支持计划。公司以“细胞外囊泡”研究中心、基础生物医学实验中心、蛋白抗体中心和分子生物学中心为依托,提供核酸和蛋白的整体研究方案,与众多科研单位携手开展了大量的探索项目。截止到目前,已支持客户发表科研论文达1000+篇,累计影响因子6000+。
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