RNA合成（单链RNA合成、双链RNA合成、RNA修饰及标记

服务介绍

RNA合成是指在体外通过化学合成方法合成RNA分子的过程，通常采用无机化学方法合成磷酸二酯键，将核苷酸逐个连接成RNA链。RNA合成是一项重要的生物技术手段，可以用于研究RNA分子的结构、功能、调控机制等方面。合成的RNA分子可以用于体外转录、RNA交互、RNA稳定性研究、RNA纯化等方面的研究。RNA合成技术已经发展成为一种高效、快速的合成RNA的方法，为RNA生物学和基因工程研究提供了有力支持。

金开瑞RNA合成服务内容包括：单链RNA合成、双链RNA合成、RNA修饰及标记、siRNA、miRNA mimics合成等。为保证RNA oligo高质量，合成RNA均经MALDI-TOF质谱鉴定 (matrix-assisted laser desorption ionization-time-offlight)，并严格执行QC标准，并通过HPLC对产物RNA进行纯度分析，保证最终发到客户手中的RNA质量。

服务优势

• 灵活多样的合成规格: 1OD、 2OD、 4OD …… , 可大批量定制；
• 20多年丰富经验的引物合成专家团队；
• 高质量: ISO 9001 认证，全面的质控报告 (HPLC/MS/CGE)；
• 具有竞争力的价格。

服务流程

•接受订单
•合成
•纯化
•质 检 
•分 装
•质 检
•发 货

客户提供

RNA序列或者需要设计的基因名称和基因序列及要求。

最终交付

• 合成的RNA冻干粉；
• COA文件；
• 检测报告 (MS/HPLC/CGE) （客户可根据实验需要选择检测方式，需另行收费）。

服务说明

产品名称	合成量（OD）
普通siRNA oligos	2
	4
	5
	>5
普通siRNA 三保一套餐	2
普通siRNA 四保一套餐	2
miRNA mimics 双链	2
miRNA mimics NC	2
miRNA inhibitors	2
单链RNA（<70nt）	2
	>2
通用阴性对照siRNA	1
FAM标记通用阴性对照siRNA	1
阳性siRNA，GAPDH	1
标记RNA oligos	2
	4

相关资源

1、RNA合成方法

①化学合成法：

    ● 化学合成法是通过将核苷酸单元逐个连接起来合成RNA的方法。这种方法通常使用有机合成化学方法，如固相合成或液相合成。

    ● 在固相合成中，RNA链是在具有固定的核苷酸单元的合成支持上逐步构建的。每个核苷酸单元都具有保护基团，防止不需要的反应发生。核苷酸单元的添加通过去保护和活化步骤完成。

    ● 在液相合成中，核苷酸单元通过液相反应逐渐连接起来。这种方法通常用于较短的RNA片段的合成。

 

②体外转录法：

    ● 体外转录法利用体外转录系统合成RNA。这种方法通常使用DNA模板和RNA聚合酶来合成RNA。

    ● 在体外转录中，DNA模板需要包含适当的启动子序列，以使RNA聚合酶能够识别和启动转录。通过加入核苷酸三磷酸（NTPs）和其他必要的辅助物质，体外转录系统可以合成RNA。

    ● 体外转录法可以使用细胞提取物或重组的RNA聚合酶进行。

 

③基于RNA酶的合成法：

    ● 基于RNA酶的合成法利用RNA酶的催化活性合成RNA。这种方法通常使用类似于体外转录的原理，但使用RNA酶代替RNA聚合酶。

    ● RNA酶可以选择性地切割或连接RNA链的特定位置，从而合成特定的RNA序列。

 

2、在RNA合成中需要特别注意的点
   
    ●  模板设计和优化：选择合适的DNA模板是体外转录或化学合成的关键。确保模板具有适当的启动子序列、适当的长度和正确的目标序列。

    ●  高质量的起始材料：使用高质量的核苷酸单体、试剂和酶是确保合成RNA的成功的重要因素。确保使用新鲜、纯净和高质量的材料，避免使用过期或受污染的试剂。

    ●  脱保护步骤：对于化学合成方法，合成的RNA链通常会在核苷酸单元上有保护基团。脱除这些保护基团是合成成功的关键步骤，通常需要严格控制反应条件和使用适当的脱保护试剂。

    ●  RNA纯化和质量控制：合成的RNA可能会包含未反应的试剂、副产物或其他污染物。因此，在合成完成后，需要进行适当的纯化步骤来去除这些杂质。此外，通过凝胶电泳、质谱分析等方法对RNA进行质量检查和验证，以确保所得到的RNA是纯净且具有所需的序列。

    ●  RNA的稳定性：由于RNA易于降解，合成的RNA需要储存在适当的条件下，如低温和干燥环境中。使用RNase抑制剂和适当的储存缓冲液可以增加RNA的稳定性。

    ● 注意反应条件：在体外转录或化学合成过程中，确保适当的反应温度、时间和缓冲条件。反应条件的优化可能需要针对特定的RNA序列和合成方法进行调整。

    ● 防止RNA降解：在RNA合成和处理过程中，需要小心避免RNA受到RNase的污染。使用RNase-free的试剂和实验器材，并在操作过程中采取严格的无菌技术，以防止RNA的降解。

 

3、不同类型RNA的应用

RNA类型	概念	应用
普通RNA	在细胞中参与蛋白质合成的传递遗传信息的RNA分子。	- 基因表达研究：作为mRNA分子，在细胞中被翻译为蛋白质。
		- 基因功能分析：通过干扰或增强RNA表达，研究基因在生理过程中的作用。
siRNA	小干扰RNA，长度约为20-25个核苷酸，可通过RNA干扰技术靶向抑制基因表达。	- 基因沉默：通过结合RISC复合体，靶向降解特定mRNA，抑制基因表达。
		- 肿瘤治疗：设计特异性siRNA靶向抑制肿瘤相关基因，达到治疗肿瘤的目的。
miRNA	微小非编码RNA，调控基因表达的调节子，长度约为20-25个核苷酸。	- 抗病毒研究：抑制病毒复制和感染，研究抗病毒机制和开发抗病毒治疗方法。
		- 基因表达调控：与mRNA互作，通过诱导降解或抑制翻译调控基因表达。
		- 发育调控：参与胚胎发育、细胞分化以及生物体的生长和发育过程。
修饰RNA	经过化学修饰的RNA分子，具有增强稳定性或改变功能的特性。	- 疾病研究：研究miRNA与疾病发生、进展以及治疗潜力之间的关联
		- 抗病毒研究：改变RNA分子的结构和稳定性，用于抗病毒药物的研发。
		- RNA疫苗：修饰RNA作为疫苗载体，用于激发免疫反应以预防疾病
sgRNA	单导RNA，用于CRISPR-Cas9基因编辑技术中的靶向DNA序列的引导RNA。	- 基因编辑：与Cas9蛋白结合，引导Cas9蛋白靶向特定DNA序列
ASO	寡核苷酸序列，具有特定序列和结构，用于靶向调控RNA的表达或功能。	- 基因沉默：通过与RNA靶点结合，抑制或调控特定RNA的表达。
		- 遗传疾病治疗：针对某些遗传性疾病中的突变基因进行精准调控和治疗。
		- RNA稳定性调控：通过结合RNA分子，增强或降低其稳定性来调节RNA功能。