修饰引物合成| 修饰/标记引物合成| 特殊修饰和结构 oli

服务介绍

修饰/标记引物是指在普通引物的基础上，通过添加特定的化学修饰或荧光标记来增强PCR反应的特异性和检测灵敏度。常见的引物修饰形式包括有磷酸化、生物素、地高新、内部氨基修饰、5’氨基修饰、3’氨基修饰等，可用于各种非放射性免疫分析、杂交反应。这些修饰/标记可以使引物与目标DNA序列更紧密结合，增加PCR反应的特异性和选择性，同时也可以使扩增产物在后续的检测过程中更易于检测和分析。修饰/标记引物广泛应用于病原体检测、基因型鉴定、基因表达分析等领域，为科学家们提供更精确、高灵敏度的分子生物学工具。

服务优势

• 丰富的引物修饰/标记类型，大规模测序验证平均突变率低于1/1000
• 严格执行ISO 9001和ISO 13485统一质控标准，产品过程可追溯性强，批次记录完善
• 多种纯化方式可供选择，按需定制化各种规格、发货形式和特殊引物合成
• 便捷完善的引物合成在线订购系统，经验丰富引物合成专家团队和技术支持

服务流程

•订单接收
•合 成
•纯 化
•质 检
•分 装
•质 检 
•发 货

客户提供

引物合成订购表

需详细填写客户信息、序列、碱基数、纯化方式等信息

最终交付

• 对应合成量的标记/修饰引物冻干粉
• 引物操作说明书。

案例展示

 

相关技术服务

定点突变

亚克隆/载体构建

DNA测序

基因合成

RNA pull-down
 

相关资源

1、 常见的引物修饰和标记的介绍及应用

修饰/标记类型	描述	应用领域
荧光标记引物	引物上连接荧光染料或荧光物质，用于可视化实验	荧光PCR、原位杂交、荧光探针技术等
生物素标记引物	引物上连接生物素分子，用于亲和素-双亲和素系统的富集或检测	生物素-链酶扩增法（Biotin-ELISA）等
磷酸化引物	引物中引入磷酸化基团，增强与酶的结合能力	PCR扩增、DNA测序等
逆转录引物	用于逆转录反应，将RNA转录成cDNA的引物	RT-PCR、基因表达分析等
锚定引物	引物上引入锚定序列，用于PCR扩增后的测序特异性结合或适配体连接	测序、基因组拼接等
化学修饰引物	引物上引入化学修饰基团，如甲基化、磷酸化或其他修饰	DNA甲基化分析、DNA交联实验、荧光共振能量转移（FRET）等实验

 

 

2、在修饰/标记引物合成过程中，常见的实验难点及解决方案

①引物纯度和质量控制：

    ● 使用高纯度的试剂和原料。

    ● 选择适当的合成方法和纯化技术，如薄层凝胶电泳、高效液相色谱等。

    ● 进行质量控制检测，如质谱分析、DNA浓度测量等。

 

②引物修饰效率和位置：

    ● 优化修饰反应条件，包括修饰试剂浓度、反应时间和温度。

    ● 选择合适的修饰化学反应或酶法。

    ● 进行修饰效率的评估和验证。

 

③引物稳定性和储存：

    ● 选择稳定的修饰或标记化学基团。

    ● 存储引物在适当的条件下，如低温和干燥环境。

    ● 定期检查引物的稳定性和活性。

 

④引物特异性和选择性：

    ● 优化引物设计，包括序列选择、引物长度和碱基组成。

    ● 使用引物设计软件进行特异性分析和评估。

    ● 进行引物的特异性验证实验，如PCR扩增和测序分析。

 

⑤引物使用前的测试：

    ● 进行引物的特异性验证实验，如PCR扩增和测序分析。

    ● 进行引物的功能性验证实验，如结合实验、放射性标记实验等。

    ● 使用引物设计软件进行理论分析和预测引物的性能。

 

3、在修饰/标记引物的设计和分析过程中，有哪些在线工具可以辅助研究人员进行操作和分析

    ● IDT OligoAnalyzer：由Integrated DNA Technologies (IDT) 提供的工具，用于评估引物的物理特性，如熔解温度、GC含量和二级结构等。网址：idtdna.com/calc/analyzer

    ● Primer3：用于引物设计的广泛使用的工具，可以根据指定的参数自动设计引物，如引物长度、熔解温度范围和目标序列要求等。网址：bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/

    ● UCSC In-Silico PCR：通过在基因组数据库中进行模拟PCR来评估引物的特异性，帮助确定引物是否会扩增非特异性产物。网址：genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgPcr

    ● NCBI Primer-BLAST：由美国国家生物技术信息中心 (NCBI) 提供的工具，用于设计引物和评估其特异性，可以与NCBI数据库进行比对分析。网址：ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/

    ● DNAWorks：用于设计引物和评估引物性能的工具，可以进行引物设计、优化和评估引物的特异性和稳定性。网址：helixweb.nih.gov/DNaworks/

    ● NEBuilder Assembly Tool：由New England Biolabs提供的在线工具，用于设计和优化DNA片段的引物，并进行引物的限制酶消化和连接设计。nebuilder.neb.com