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- 信帆生物
- WB001
- 2025年07月16日
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上海信帆生物科技有限公司
简介：Western blot（免疫印迹实验）实验服务
提供商：上海信帆生物科技有限公司
服务名称：Western blot实验服务
| 服务名称 | 标本要求 | 实验周期 | 单位 |
| WB（普通蛋白） | 组织、蛋白、细胞 | 2周内 | 每张膜 |
Western blot简介
蛋白质印记又称免疫印记，根据抗原抗体的特异性结合检测样品中的某种蛋白的方法。它是利用特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
Western blot实验外包，免疫印迹实验实验外包
Western blot的原理
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
Western blot样本要求
客户需新鲜或正确保存的蛋白样品， 检测目的蛋白的一抗（或由本公司代购）。样品要求为：
1、裂解样品总蛋白量>500ug/样品。
2、细胞样品总蛋白浓度>1mg/ml。
3、组织样品总蛋白浓度>10-15mg/ml。
Western blot结果及数据提供
内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张，可提供扫描图，实验报告，包括整个试验流程所涉及的实验数据和实验步骤。如需进行蛋白纯化服务，将提供检测报告
Western blot实验服务
服务内容
我们提供从蛋白制备、蛋白电泳到Western blot检测的全流程服务，如需要还可进行灰度分析。
说明
1、建议提供目的蛋白阳性表达样品（纯蛋白或有阳性表达的细胞或组织）作为阳性对照。
2、每张膜检测1-8个样品。
3、如果一抗由客户提供，请在正确条件下保存，避免污染及反复冻融。
关于Western blot实验异常分析
『无信号』
| 原因 | 建议 |
| 一抗与二抗不匹配 | 选择针对一抗来源种属制备的二抗； |
| 一抗不识别目的的种属的蛋白 | 1)检查抗体的说明书，适用范围内是否包含目的种属 |
| 一抗或二抗不足，没有足够的抗体结合到目的蛋白 | 1)降低抗体稀释倍数，增加抗体浓度 |
| 封闭剂与一抗有交叉反应 | 改变封闭剂 |
| 抗原不足 | 1)每个泳道加入20-30ug总蛋白 |
| 在检测的组织内目的蛋白表达水平低 | 检测样本不表达目的蛋白选择表达量高的细胞作为阳性对照，用于确定检测样本是否为阴性，也可更换细胞系 |
| 蛋白转膜效率低 | 1)利用丽春红检测转膜效率;检查转移装置是否电极弄反 |
| 膜过渡洗涤 | 减少洗涤时间和强度 |
| 叠氮钠抑制二抗活性 | 二抗稀释液内不用叠氮钠 |
『没有特异条带』
| 原因 | 建议 |
| 细胞系传代过多后蛋白表达谱发送变化 | 1)使用未传代或传代次数较少的细胞系进行样品制备 |
| 蛋白本身有很多修饰 | 1)查阅文献，确定目的蛋白是否存在多种修饰 |
| 蛋白被消化或者降解 | 1)蛋白样品确保未被污染，确保含有蛋白酶抑制剂 |
| 所检测蛋白存在多种剪接体，导致分子量大小不同 | 1)查阅文献或者通过搜索数据库来确定该蛋白是否存在多种长度不同的编码mRNA |
| 一抗或二抗浓度高 | 1)减低抗体浓度 |
| 洗涤不够 | 1)充分洗涤 |
『条带大小不正确』
| 原因 | 建议 |
| 目的蛋白被降解 | 确保蛋白样品未被污染，确保含有蛋白酶抑制剂 |
| 存在不同的剪接体 | 查阅文献或者通过搜索数据库来确定该蛋白是否存在多种长度不同的编码mRNA |
| 重组蛋白 | 检测是否存在额外加入的蛋白 |
| 特殊蛋白如MDM2等 | 仔细阅读抗体说明书 |
尊敬的客户：
本公司有放射免疫技术服务、蛋白质组学服务、免疫组化、PCR技术服务、生物信息学数据分析等，如果您想了解Western blot的更多内容或者其他服务信息，您可以拨打本公司的服务热线了解更多产品的详细信息，至善至美的服务是我们永无止境的追求，欢迎新老客户放心选购自己心仪产品，我们将竭诚为您服务！
上海信帆生物科技有限公司
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Western blot实验外包，免疫印迹实验实验外包
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文献和实验样本准备 蛋白提取 所需仪器：匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF（蛋白酶抑制剂）、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子，消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液：PMSF=100：1。 1） 组织处理：首先用酒精棉消毒剪刀和镊子，取适量的组织于匀浆器中，用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。（含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆） 2） 细胞处理： A、 贴壁细胞处理：去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解
llh刘丽华 各位好：我做了1个多月western blot了，内参跑得还可以，但是目的蛋白总是跑不好，今天跑出来非特异性条带很清楚，而目的条带却很淡，不知是什么原因！前一次也是这种情况，我就延长封闭时间至2h，一抗1:700，二抗1:5000，请各位高手帮忙分析一下吧！下面是我的图片，最下面，模糊的一条（靠图片中间的一条）是我的目的条带！ coffeeshine 如果非特异带很清楚，延长封闭时间没作用
xylish1 菜鸟一枚，目前要做HER-2（膜蛋白，185KD）western blot ，求教各位，一抗哪个公司的好？使用时抗体浓度，转膜时间及注意事项，多谢！ zhe992000 搭车求助，我想验证肿瘤组织中透明质酸（hyaluronan）的表达水平，这是一个糖蛋白，主要在细胞外基质中表达。在文献上一般是通过透明质酸合成酶的水平 或者透明质酸水解酶的水平来间接判断透明质酸的表达水平，我想直接测定透明质酸的表达量，不知
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