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Western blot(免疫印迹实验)实验外包

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供应商信息

上海信帆生物科技有限公司
商家诚信度:
成立时间:2013
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产品信息完整度:61%
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产品详情

品牌: 上海信帆
货号: WB001
供应商: 上海信帆生物科技有限公司
简介:Western blot(免疫印迹实验)实验服务

提供商:上海信帆生物科技有限公司

服务名称:Western blot实验服务
服务名称 标本要求 实验周期 单位
WB(普通蛋白) 组织、蛋白、细胞 2周内 每张膜
 

Western blot简介 


   蛋白质印记又称免疫印记,根据抗原抗体的特异性结合检测样品中的某种蛋白的方法。它是利用特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

 

Western blot的原理 


   Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

 

   以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。


 

Western blot样本要求

客户需新鲜或正确保存的蛋白样品, 检测目的蛋白的一抗(或由本公司代购)。样品要求为:

 

1、裂解样品总蛋白量>500ug/样品。

2、细胞样品总蛋白浓度>1mg/ml。

3、组织样品总蛋白浓度>10-15mg/ml。

 

Western blot结果及数据提供

内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张,可提供扫描图,实验报告,包括整个试验流程所涉及的实验数据和实验步骤。如需进行蛋白纯化服务,将提供检测报告



Western blot实验服务

服务内容

我们提供从蛋白制备、蛋白电泳到Western blot检测的全流程服务,如需要还可进行灰度分析。

说明

1、建议提供目的蛋白阳性表达样品(纯蛋白或有阳性表达的细胞或组织)作为阳性对照。

2、每张膜检测1-8个样品。

3、如果一抗由客户提供,请在正确条件下保存,避免污染及反复冻融。

 


 

 

关于Western blot实验异常分析


『无信号』

原因 建议
一抗与二抗不匹配 选择针对一抗来源种属制备的二抗;
一抗不识别目的的种属的蛋白

1)检查抗体的说明书,适用范围内是否包含目的种属
2)使用阳性对照来检查抗体质量

一抗或二抗不足,没有足够的抗体结合到目的蛋白

1)降低抗体稀释倍数,增加抗体浓度
2)延长孵育时间

封闭剂与一抗有交叉反应 改变封闭剂
抗原不足

1)每个泳道加入20-30ug总蛋白
2)制备样品要使用蛋白酶抑制物及使用阳性对照

在检测的组织内目的蛋白表达水平低 检测样本不表达目的蛋白选择表达量高的细胞作为阳性对照,用于确定检测样本是否为阴性,也可更换细胞系
蛋白转膜效率低

1)利用丽春红检测转膜效率;检查转移装置是否电极弄反
2)转移前膜是否用甲醇侵泡过

膜过渡洗涤 减少洗涤时间和强度
叠氮钠抑制二抗活性 二抗稀释液内不用叠氮钠

 

 

『没有特异条带』

原因 建议
细胞系传代过多后蛋白表达谱发送变化 1)使用未传代或传代次数较少的细胞系进行样品制备
蛋白本身有很多修饰 1)查阅文献,确定目的蛋白是否存在多种修饰
蛋白被消化或者降解 1)蛋白样品确保未被污染,确保含有蛋白酶抑制剂
所检测蛋白存在多种剪接体,导致分子量大小不同 1)查阅文献或者通过搜索数据库来确定该蛋白是否存在多种长度不同的编码mRNA
一抗或二抗浓度高 1)减低抗体浓度
洗涤不够 1)充分洗涤

 

 

『条带大小不正确』

原因 建议
目的蛋白被降解 确保蛋白样品未被污染,确保含有蛋白酶抑制剂
存在不同的剪接体 查阅文献或者通过搜索数据库来确定该蛋白是否存在多种长度不同的编码mRNA
重组蛋白 检测是否存在额外加入的蛋白
特殊蛋白如MDM2等 仔细阅读抗体说明书

 

 

尊敬的客户:
本公司有放射免疫技术服务、蛋白质组学服务、免疫组化、PCR技术服务、生物信息学数据分析等,如果您想了解Western blot的更多内容或者其他服务信息,您可以拨打本公司的服务热线了解更多产品的详细信息,至善至美的服务是我们永无止境的追求,欢迎新老客户放心选购自己心仪产品,我们将竭诚为您服务!

 


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      Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。公司抗体库已包含200余种抗体!可以为客户节省购买抗体费用!欢迎来电咨询!
实验内容 标本名称 标本要求 保  存 价 格 结 果 内 容 客户提供内容 备    注 WB 细胞 至少6孔板细胞 常温,尽快处理 100/标本/蛋白 蛋白、曝光胶片、电子结果、实验报告、试剂清单 一抗抗体及抗体信息 6孔板细胞大约做3-4个蛋白。 蛋白、菌液 建议200ug以上蛋白 低温保存 蛋白最好是变性后保存 组织 50mg 黄豆大小 低温保存 含蛋白提取,测浓度,内参检测。 蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
western Blot服务服务内容:    提取客户提供的组织样本中的蛋白,进行 SDS-PAGE 电泳操作,将蛋白转至 PVDF 膜上,对该膜用目的蛋白的特异性抗体进行处理,然后显色,确定是否有目的蛋白及其分子量的大小。 服务流程服务特点       1.   分辨率高,采用 SDS-PAGE 变性电泳。底片是 DAB 发光液显色(Ecl);       2.   灵敏度高,可检测到 pg 级。我们可供选择的内参包括:GAPDH,β-actin;       3.   准确性高,通过与内参蛋白比较靶蛋白的相对含量。 样品信息:       1.   足量新鲜的组织或细胞样品;       2.   相应的一抗,如委托我们购买需要提供一抗的品牌及其货号;       3.   相关的文献资料。 服务价格        1.   1100元/1张膜(醋酸纤维膜);        2.   每张膜有10道,1道(或两道)用于蛋白MARKER;        3.   我们的服务包括蛋白质提取和定量费用,如是特殊的蛋白提取费用另计。 服务周期:        1.   30样品以下在收到样品后1-2周内提交结果。        2.   30样品以上依据具体样品数量而定。 服务承诺:        只需要提供给我们新鲜的组织或是细胞样品我们将完成蛋白提取,浓度测定,并根据您的要求提供转膜后-曝光X胶片或使用扫描仪扫描图片及其完整的实验报告。实验报告包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。 客户须知:        1.   对预做实验提供的样品要求:应是新鲜的组织细胞样品,需低温保存提供到我公司        2.   实验所用试剂;除第一抗体外,所有试剂免费,用户无须另行购买        3.   因用户所提供的样品或试剂所导致的实验问题,由用户负责。武汉爱基百客生物科技有限公司http://www.igenebook.com电话、传真:027-87606602邮箱:support@igenebook.com地址:武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物城生物创业园C6栋
如需更多实验服务请联系:cto@cloud-clone.com 或 027-84856562Western Blot WB实验服务一、服务内容1. 动物细胞、人或动物组织、细菌等样本中提蛋白、重组蛋白、血清、细胞培养上清和裂解液等;2. 测样本中总蛋白含量;3. Western Blot检测:SDS-PAGE分离样本;湿法转膜;抗体孵育和ECL显色,胶片曝光。注:免费提供内参抗体检测,也可代为用户采购一抗。二、样本要求1. 样本蛋白量大于200ug/样品;组织大于100mg;血清大于50ul;细胞大于1x107;2. -20度保存,避免反复冻融的样本。三、客户提供材料1. 新鲜保存的样本;阳性对照样本(可选);2. 提供目的蛋白的一抗,我公司也可提供上万种一抗供客户选择。四、反馈给客户结果1. WB胶片或者扫描图片;2. 对样本中目的蛋白含量的初步定量;3. 完整的实验方案。其他实验服务请参见:组织/切片定制服务原代细胞分离、培养和鉴定服务重组蛋白定制服务抗体定制服务多肽合成与小分子抗原性改造服务IHC实验服务Western Blot WB实验服务组织染色服务如需更多实验服务请联系:cto@cloud-clone.com 或 027-84856562

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