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Western blot(免疫印迹实验)实验外包

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供应商信息

上海信帆生物科技有限公司
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产品详情

品牌: 上海信帆
货号: WB001
供应商: 上海信帆生物科技有限公司
简介:Western blot(免疫印迹实验)实验服务

提供商:上海信帆生物科技有限公司

服务名称:Western blot实验服务
服务名称 标本要求 实验周期 单位
WB(普通蛋白) 组织、蛋白、细胞 2周内 每张膜
 

Western blot简介 


   蛋白质印记又称免疫印记,根据抗原抗体的特异性结合检测样品中的某种蛋白的方法。它是利用特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

 

Western blot的原理 


   Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

 

   以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。


 

Western blot样本要求

客户需新鲜或正确保存的蛋白样品, 检测目的蛋白的一抗(或由本公司代购)。样品要求为:

 

1、裂解样品总蛋白量>500ug/样品。

2、细胞样品总蛋白浓度>1mg/ml。

3、组织样品总蛋白浓度>10-15mg/ml。

 

Western blot结果及数据提供

内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张,可提供扫描图,实验报告,包括整个试验流程所涉及的实验数据和实验步骤。如需进行蛋白纯化服务,将提供检测报告



Western blot实验服务

服务内容

我们提供从蛋白制备、蛋白电泳到Western blot检测的全流程服务,如需要还可进行灰度分析。

说明

1、建议提供目的蛋白阳性表达样品(纯蛋白或有阳性表达的细胞或组织)作为阳性对照。

2、每张膜检测1-8个样品。

3、如果一抗由客户提供,请在正确条件下保存,避免污染及反复冻融。

 


 

 

关于Western blot实验异常分析


『无信号』

原因 建议
一抗与二抗不匹配 选择针对一抗来源种属制备的二抗;
一抗不识别目的的种属的蛋白

1)检查抗体的说明书,适用范围内是否包含目的种属
2)使用阳性对照来检查抗体质量

一抗或二抗不足,没有足够的抗体结合到目的蛋白

1)降低抗体稀释倍数,增加抗体浓度
2)延长孵育时间

封闭剂与一抗有交叉反应 改变封闭剂
抗原不足

1)每个泳道加入20-30ug总蛋白
2)制备样品要使用蛋白酶抑制物及使用阳性对照

在检测的组织内目的蛋白表达水平低 检测样本不表达目的蛋白选择表达量高的细胞作为阳性对照,用于确定检测样本是否为阴性,也可更换细胞系
蛋白转膜效率低

1)利用丽春红检测转膜效率;检查转移装置是否电极弄反
2)转移前膜是否用甲醇侵泡过

膜过渡洗涤 减少洗涤时间和强度
叠氮钠抑制二抗活性 二抗稀释液内不用叠氮钠

 

 

『没有特异条带』

原因 建议
细胞系传代过多后蛋白表达谱发送变化 1)使用未传代或传代次数较少的细胞系进行样品制备
蛋白本身有很多修饰 1)查阅文献,确定目的蛋白是否存在多种修饰
蛋白被消化或者降解 1)蛋白样品确保未被污染,确保含有蛋白酶抑制剂
所检测蛋白存在多种剪接体,导致分子量大小不同 1)查阅文献或者通过搜索数据库来确定该蛋白是否存在多种长度不同的编码mRNA
一抗或二抗浓度高 1)减低抗体浓度
洗涤不够 1)充分洗涤

 

 

『条带大小不正确』

原因 建议
目的蛋白被降解 确保蛋白样品未被污染,确保含有蛋白酶抑制剂
存在不同的剪接体 查阅文献或者通过搜索数据库来确定该蛋白是否存在多种长度不同的编码mRNA
重组蛋白 检测是否存在额外加入的蛋白
特殊蛋白如MDM2等 仔细阅读抗体说明书

 

 

尊敬的客户:
本公司有放射免疫技术服务、蛋白质组学服务、免疫组化、PCR技术服务、生物信息学数据分析等,如果您想了解Western blot的更多内容或者其他服务信息,您可以拨打本公司的服务热线了解更多产品的详细信息,至善至美的服务是我们永无止境的追求,欢迎新老客户放心选购自己心仪产品,我们将竭诚为您服务!

 


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简介:Western blot(免疫印迹实验)实验服务提供商:上海信帆生物科技有限公司服务名称:Western blot实验服务 服务名称 标本要求 实验周期 单位 WB(普通蛋白) 组织、蛋白、细胞 2周内 每张膜  Western blot简介    蛋白质印记又称免疫印记,根据抗原抗体的特异性结合检测样品中的某种蛋白的方法。它是利用特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。 Western blot的原理    Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。    以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。  Western blot样本要求客户需新鲜或正确保存的蛋白样品, 检测目的蛋白的一抗(或由本公司代购)。样品要求为: 1、裂解样品总蛋白量>500ug/样品。2、细胞样品总蛋白浓度>1mg/ml。3、组织样品总蛋白浓度>10-15mg/ml。 Western blot结果及数据提供内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张,可提供扫描图,实验报告,包括整个试验流程所涉及的实验数据和实验步骤。如需进行蛋白纯化服务,将提供检测报告Western blot实验服务服务内容我们提供从蛋白制备、蛋白电泳到Western blot检测的全流程服务,如需要还可进行灰度分析。说明1、建议提供目的蛋白阳性表达样品(纯蛋白或有阳性表达的细胞或组织)作为阳性对照。2、每张膜检测1-8个样品。3、如果一抗由客户提供,请在正确条件下保存,避免污染及反复冻融。    关于Western 信帆xfwbdc002
Western blot实验代测免疫印迹(immunblotting)又称蛋白质印迹(western blot),他是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现在已成为蛋白分选的一种常规技术。免疫印迹(western blot)常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分选。Western blot的原理    Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。    以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 技术原理图   Western blot实验代测 Western blot样本要求客户需新鲜或正确保存的蛋白样品, 检测目的蛋白的一抗(或由本公司代购)。样品要求为: 1、裂解样品总蛋白量>500ug/样品。2、细胞样品总蛋白浓度>1mg/ml。3、组织样品总蛋白浓度>10-15mg/ml。 Western blot结果及数据提供内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张,可提供扫描图,实验报告,包括整个试验流程所涉及的实验数据和实验步骤。如需进行蛋白纯化服务,将提供检测报告Western blot实验服务服务内容我们提供从蛋白制备、蛋白电泳到Western blot检测的全流程服务,如需要还可进行灰度分析。说明1、建议提供目的蛋白阳性表达样品(纯蛋白或有阳性表达的细胞或组织)作为阳性对照。2、每张膜检测1-8个样品。3、如果一抗由客户提供,请在正确条件下保存,避免污染及反复冻融。 western blot (WB)服务须知: 1. 样本要求尽可能新鲜;2. 样国产进口western blot023
1)技术原理:蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象.根据所采用的支持物不同,有琼脂糖凝胶电泳,淀粉凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳等.其中,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)由于无电渗作用,样品用量少(1-100μg),分辨率高,可检出10-9-10-12mol的样品,凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶等优点而受到广泛的应用. -O{`?’Q%9v      SDS-PAGE是最 常用的定性分析蛋白质的电泳方式,特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量. }~<+{sQPAGE能有效的分离蛋白质,主要依据其分子量和电荷的差异,而SDS-PAGE(SDS变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳)的分离原理则仅根据蛋白质的分子量的差异,因为SDS-PAGE的样品处理液是在要跑电泳的样品中假如含有SDS和巯基乙醇(2-ME)或二巯基赤藓醇(DTT),其可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质的四级结构,SDS是一种阴离子表面活性剂即去污剂,它可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级及三级结构,并与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,电泳样品假如样品缓冲液后,要在沸水中煮3-5分钟使SDS与蛋白质充分结合形成SDS-蛋白质复合物,SDS-蛋白质复合物在强还原剂巯基乙醇存在时,蛋白质分子内的二硫键被打开而不被氧化,蛋白质也完全变性和解聚,并形成榛状结构,稳定的存在于均一的溶液中,SDS与蛋白质结合后使SDS-蛋白质复合物上带有大量的负电荷,平均每两个氨基酸残基结合一个SDS分子,这时各种蛋白质分子本身的电荷完全被SDS掩盖,远远超过其原来所带的电荷,从而使蛋白质原来所带的电荷可以忽略不计,消除了不同分子之间原有的电荷差别,其电泳迁移率主要取决于亚基分子质量的大小,这样分离出的谱带也为蛋白质.2)主要实验步骤:1. 蛋白质抽提2. 蛋白质定量3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)4. 蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜5. 膜的封闭和抗体孵育6. 结果检测7. 提供实验报告服务内容您需要提供以下材料:组织或细胞和一抗,或者一抗代购您将获得以下结果:电子图片,结果分析  

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