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- 2025年07月15日
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12月
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BestBio-贝博
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大量
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100ml
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文献和实验llh刘丽华 请教高手我最近做western blot，结果总是不理想，目的条带总是很淡，上样量已经是60ug了，封闭用的是5%脱脂奶粉，我还应该怎么改进哦？下面是我的结果，采用的是ECL化学发光，凝胶成像系统拍照，下面一条是我的目的条带。 麻烦各位帮帮忙吧！ Mostino 转膜应充分，并提高第一抗体的使用量！ 成其瑞 用好点的抗体 volano
(All steps with agitation, unless done O/N at 4℃)►Rinse membrane once in TBS-T►Block the membrane with TBS-T/ 5% milk (or HIHS) for 30 min room►temp (can be left at 4℃ O/N here)►Rinse membrane briefly 2X with TBS-T and then once for 10 min with TBS
一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。 1．HRP-ECL 发光法： 将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 A、B 混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5 min 左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中 1～2 min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定
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