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上海信帆生物科技有限公司
细胞贴壁粘附剂
产品简介:
一种新型化合物,用之室温处理培养瓶 30 分钟,能够使原代或传代培养细胞的粘附贴壁能力显著增加,处理效果优于使用多聚赖氨酸和胶原蛋白,同时对绝大多细胞类型均有明显效果,例 如:胶原蛋白处理瓶皿对 HEK293 细胞无效,但细胞贴壁粘附剂 对 HEK293 细胞有很好的 效果,且能显著提高细胞转染效率。本产品无细胞毒性,不影响后续免疫荧光组化和酶学测定等实验,适用于各种原代细胞如乳鼠脑神经元、易漂浮的传代细胞如 PC12 和 HEK293 细胞,也适用于药物处理易漂浮细胞;其不仅能够明显改善细胞生长状态、增加细胞数量,还可以使细胞容易耐受洗涤、换液、药物处理造成的脱落。对于生长在处理过的瓶皿中的细胞而言,使用细胞贴壁粘附剂可使细胞的转染效率显著增加 2-5 倍。
需要注意的是,不同的细胞类型对贴壁粘附剂的需求和反应可能会有所不同。因此,在选择和使用细胞贴壁粘附剂时,需要根据具体的细胞类型和实验需求进行选择。同时,也需要注意细胞贴壁粘附剂的质量和来源,以确保实验结果的准确性和可靠性。
产品名称:细胞贴壁粘附剂
产品货号:XF1010
规格:1ml
储存条件:4℃
有效期:12个月
用途及特征:
1. 各种原代细胞如脑神元的贴壁培养;
2. 易漂浮的传代细胞系如 PC12 和 HEK293 细胞;
3. 能够防止洗涤、换液、药物处理导致的细胞漂浮脱落问题;
4. 能够使真核细胞的转染效率增加 2-5 倍;
5. 无细胞毒性,不影响后续免疫荧光组化和酶学测定。
操作步骤(仅供参考):
1、将样本DNA溶液与DNS试剂混合,加热至沸,冷却后加入乙醇和醋酸钠溶液。
2、加入新配制的氨基联氨溶液,混匀后静置片刻。
3、加入甲-醛溶液,混匀后静置30分钟至1小时。
4、用紫外可见分光光度计测定580nm处的吸光度值,根据标准曲线计算出样本中DNA的浓度。
使用说明:
1. 使用时,将此浓缩溶液以 1:200-1:500 比例稀释于灭菌纯水或生理盐水(0.9% NaCl)或 PBS缓冲液中,制备成工作溶液。注意:不同细胞对粘附剂的敏感度不同,通常粘附剂处理后的器皿培养细胞形态及生长状态均应正常,如果细胞比较敏感,选用高浓度的细胞贴壁粘附剂会使细胞过度粘着,有可能出现细胞褶皱、伪足伸出不畅或细胞移动分散不佳等现象,此时应将其进行高比例稀释,避免出现以上情况。
2. 加入新鲜工作液使其完-全覆盖培养瓶皿表面。室温或 37 ºC 孵育 30 min,偶尔摇动。
3. 完-全弃去瓶皿中的液体。可用灭菌蒸馏水或灭菌生理盐水或 PBS 缓冲液等洗涤瓶皿一次,但也可不洗涤而尽量甩干后直接铺种细胞。经过处理的瓶皿可存放数天后使用。
4. 甩干瓶皿即可用于铺种细胞,增加多种原代培养细胞如神经元细胞的贴壁能力。
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文献和实验是在PC12长至70-80%时加双氧水。还有加入的双氧水的温度,也要与培养温度相同,去除双氧水后,要用培养液把细胞洗2-3遍。丁香园ivy_mayan的问题:具体我是这样操作的:96孔板以2x10的五次方密度接种细胞,24小时后加入不同浓度的h2o2(50-500UM), 作用不同时间后(0-8h)加入MTT,孵育4h后去上清,加入DMSO溶解结晶,测490nm下的吸光值。我有以下疑问:1)板我已经过poly-l-lys处理过,但是细胞贴壁还是不好,如何解决?2)加入MTT前是否要把培养液去掉, 并用
涂片方法推片,或用另一盖玻片紧贴于其上,相互磨擦以使两盖玻片相对的一面涂布上PLL。该法制备的玻片,只有一面是包被有PLL,故制备时,待其晾干后,应作好记号,然后保存后备用。 多聚赖氨酸可用于多种核酸杂交,方法简单,结果可靠,有许多其它方法不可比拟的优点。配制好的液体可存放于4℃或室温,但时间过长会解聚而失效,故建议使用时尽量新鲜配制。 (4)Vectabond粘附剂 该试剂是Vector公司新近推出的一种新型粘附剂。它与其它粘附剂的主要区别是:一般的粘附剂是通过物理性覆盖在玻片
维持在 2-8×10^5 cell/ml 较合适; THP-1 偏好酸性环境,在偏酸性环境中生长更快,换液一般采取半量换液法; 少量细胞聚团,呈葡萄串状,属于正常现象,特别是细胞密度较低时,易出现这种情况。更换血清品牌或增大血清比例(不超过 20%)有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散,等待密度高时,会自己分散开; 少量细胞贴壁属于正常情况,将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于 20%,说明细胞生长环境有异常,需排查培养箱设置、培养基成分,以及培养器皿是否异常。 THP-1 推荐
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