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- 2025年07月12日
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- 服务名称：
稳定转染（质粒转染）
- 提供商：
广州蓝吉生物技术有限公司
服务流程：
1．杀伤曲线绘制；
2．转染质粒，铺板，用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆；
3．qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。
2.2.2特殊细胞（质粒转染）
服务流程：
1．根据细胞特点、实验特点或实验需求，设计实验方案并与客户讨论确定实验方案；
2．进行预实验，通过转染含有GFP报告基因的质粒确定最佳转染试剂，并优化转染条件；
3．杀伤曲线绘制；
4．转染质粒，铺板，用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆；
5．qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。
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文献和实验zsutx2005 最近经常做转染，所以经常会提质粒。我们用的是Omega的去内毒中提，最后溶水也是用的Endotoxin-free Elution Buffer. 提好的质粒一般放-20备用。由于隔段时间就会用，所以就出现冻融的问题。每次解冻会发现管里的白色物质有析出。拿去测定浓度，发现质粒浓度会下降20%-30%左右，这样如果继续按照之前测定的浓度做转染，就会影响质粒的定量。不知道质粒为什么会析出？有谁碰到过这种情况？如果一直放在-4度，质粒降解的就很厉害
wubin6638 请问有没有操作步骤可以分享一下的 MTT要求细胞数量较少 而转染的时候要求细胞达到80%以上 这个矛盾怎么解决呢？ shylook 转染24h后可以传下代 最好只做一次传代 再传就不推荐了 wubin6638 shylook wrote: 转染24h后可以传下代 最好只做一次传代
whm5869 我构建了一个质粒，包括目的基因片段和一小段启动子，测序结果完全正确，我们实验室的工作人员说理论上应该表达但是我转染细胞做WESTERN鉴定，就是不表达，请问这是为什么啊，谢谢各位大侠了 whm5869 我用的是polyjet转染试剂，操作等基本没问题，谢谢大家了 pharmaceutic 以前我站构建质粒的时候也遇到过这种问题，最后换了一个载体以后就表达了。最后分析认为不同
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