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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
见说明书
- 亚型:
见说明书
- 形态:
粉末/液体
- 保存条件:
-20oC 至 -80oC
- 克隆性:
Polyclonal
- 标记物:
未标记
- 适应物种:
Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
- 宿主:
Rabbit,兔
- 应用范围:
WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- 浓度:
200ug/ml
- 靶点:
见说明书
- 抗体英文名:
Polyclonal Antibody to Metallothionein 2 (MT2)
- 抗体名:
金属硫蛋白2(MT2)多克隆抗体
- 规格:
100ug/200ug
www.klbscience.com
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
选择动物时应考虑抗原和免疫动物的种属差异,种系相近会影响免疫效果,一般要求动物适龄,健康,体重符合要求。常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。动物接受免疫的乳液量小鼠为1.0~2.0 ml, 家兔为2~4 ml。添加佐剂可帮助抗原在注射部位缓慢释放,增加免疫效果,常用佐剂为弗氏不完全佐剂。
初次免疫后要经过2~3次以上的加强免疫以形成较高水平的IgG抗体。初次免疫和再次免疫之间,小动物一般间隔10~14天,大动物间隔60天左右。在每次加强免疫后,进行抗血清效价测定,当效价达到理想状态时,便采集抗血清。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。也可采用尾巴或眼眶取血,静置待血液凝固成血块收缩析出血清,3000rpm离心15 min,取上清。这个过程要注意动物的养护,耗时长,但得率低,得到的血清还需进一步的纯化。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
由于多克隆抗体具有成本低、制备周期短且制备步骤相对简单、可识别多个表位等优点,在科研领域应用非常广泛。以上就是关于多克隆抗体制备的一个基本流程。供大家参考。
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文献和实验Nat Metab:栾冰团队发现锌离子介导脂肪细胞与交感神经信号交流,为肥胖治疗提供新思路
神经细胞上的 ZIP12 激活 ERK 信号通路从而促进交感神经突触生长的机制。更为重要的是研究人员揭示了脂肪细胞中重要锌离子调控蛋白金属硫蛋白(Metallothionein 2,MT2) 在肥胖发生中的重要作用,而这一作用依赖于其对 Zn 离子释放和交感投射的影响。因此,该研究确定了产热脂肪细胞和交感神经元相互调节的正反馈机制。这种机制对于适应性产热很重要,可以作为治疗肥胖的潜在靶标。 同济大学医学院博士生姜俊坤、复旦大学上海肿瘤中心胃外科、复旦大学上海医学院肿瘤科周东雷主任医师、浙江大学博士生张安可、同济
(1)缓冲体系。纯化后的抗体必须处于一个相对接近体液的缓冲体系中,一般的PBS体系就足够了。注意不要引入高浓度的离子,尤其是金属离子。不要引入干扰抗体实验的离子或基团。 (2)防腐剂。为了防止抗体长菌,必须加入防腐剂,常见的防腐剂有:叠氮钠、硫柳汞、抗生素(庆大霉素)。叠氮钠的常用浓度是0.02%,硫柳汞和庆大霉素的常用浓度为0.01%,其中叠氮钠会抑制HRP酶活性,因此在需要偶联HRP酶的抗体中不能加这种防腐剂,而且叠氮钠会影响细胞色素氧化酶活性,会干扰机体的呼吸作用,因此操作时需要注意
免疫组化基础知识 免疫组织化学的概念: 免疫组化就是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学。 免疫组化实验所用的抗体有哪些? 免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫
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