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EMSA实验技术服务
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上海达为科生物科技有限公司
EMSA实验技术服务
凝胶迁移或电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)是研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。
EMSA实验技术服务
EMSA:凝胶迁移或电泳迁移率检测是一种检测蛋白质和DNA序列相结合的技术,初用于研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用,可用于定性和定量分析。分为2种类型:同位素标记探针,非同位素标记探针。
通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA的片段和寡核苷酸片段(特异),和其它非相关的片段(非特异),来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。
EMSA实验技术服务 实验步骤:探针的标记,探针的纯化,EMSA胶的配制,EMSA的结合反应,探针冷竞争反应,突变探针冷竞争,super-shift 反应,电泳。
服务内容:包含电子版扫膜结果及灰度值分析,每张膜可做1-7个样本。
EMSA实验技术服务 服务流程:
标记探针(或标记号的探针)+ 提取样本蛋白质→结合探针→凝胶电泳→显影→图像保存。
客户方需提供:
组织或细胞样本,探针。
实验周期:
1-2周/指标。
提供结果:
蛋白浓度,电泳图,实验报告。

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文献和实验luozhifeng339 请教各位达达,我准备做EMSA,如果做SUPER-SHIFT的话,该选择原装抗体还是分装的抗体呢,盼不吝赐教! wanglinling 看到一篇EMSA的文章,不知道里面有没有回答你的问题哈,不过英文的值得阅读哈。 GEL SUPER-SHIFT ASSAY/ EMSA Materials/Reagents: See Gel-shift assay Procedure
EMSA是一个比较复杂的试验技术,由于工作原因接触这个试验技术到现在也有三年多的时间了,做了大概也有几百次吧, 那倒理想的试验结果的同时也碰到了很多莫名的问题和结果,到现在为止还有没有解决的,找不到原因的一个问题,呵呵! 现和smalldonkey商量一下将我对这个实验技术的总结和一个心得写出来给大家分享,批评指正。EMSA实验技术作为一个经典的DNA/protein,RNA/protein的检测技术,不是很多简单的实验技术可以替代的! 比如曾经在我们这个论坛中有站友提到
改善EMSA的电泳结果。如需纯化,可以按照如 下步骤操作:(1) 对于100微升标记好的探针,加入1/4体积即25微升的5M醋酸铵,再加入2体积即200微升的无水乙醇,混匀。(2) 在-70℃至-80℃沉淀1小时,或在-20℃沉淀过夜。(3) 在4℃,12, 000g-16, 000g离心30分钟。小心去除上清,切不可触及沉。(4) 在4℃,12, 000g-16, 000g离心1分钟。小心吸去残余液体。微晾干沉淀,但不宜过分干燥。(5) 加入100微升TE,完全溶解沉淀。标记好的探针最好立即使用










