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- REBIO
- K599
- 2026年01月24日
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1ml 甘油菌
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K599发根农杆菌使用方法
- 简要介绍
| 菌种名 | K599发根农杆菌 |
| 拉丁名 | Agrobacterium rhizogenes |
| 基因型 | Agrobacterium rhizogenes (strR ) pRi2659 (agropine type) |
| 代数 | 2代 |
| 运输形式 | 穿刺接种方式，固体培养基上生长 |
| 特征 | 诱导毛状根，具有链霉素抗性。 |
| 保存 | 含30%甘油菌液放于-80度可长期保存 |
| 培养基 | TY培养基 |
- 使用方法
（2）用接种环接种至3mL 发根农杆菌（50μg/ml Str）液体培养基中28度培养至OD600=0.50，按照照1：1的体积比加入50%甘油，按照每管200ul的量分装至1.5 mL的EP管中，-80度保存。
（3）按照10%的接种量接种至100 mL 发根农杆菌（50μg/ml Str）液体培养基中28度培养至OD600=0.50，按照1：1的体积比加入50%甘油，按照每管1mL的量分装至1.5 mL的EP管中，-80度保存。
（4）我们推荐保存2代，视为安全保菌方式。
目前采用的发根农杆菌主要有天然农杆碱型的A4、ATCCl5834、16834、LBA9402及
1601、R1000、R1200等人工构造质粒；还有黄瓜碱型的2635、2657、2659等；以及
甘露碱型的5196、TRl01、TR7等，每一种菌株对不同植物的发根能力是不同的。
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文献和实验1双元载体的农杆菌转化 1.1农杆菌感受态细胞的制备 1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养。 1.1.2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。 1.1.3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中，28℃220rpm振荡培养至OD600=0.5。 1.1.4. 转入无菌离心管，5000rpm离心5min,去上清液。 1.1.5. 加入10ml预冷的0.1M的CaCl2溶液
农杆菌介导的植物遗传转化 【目的】：学习和掌握共培养过程关键技术环节及转基因植株的筛选。 【要求】：以烟草叶片为材料，与对数生长期的带有外源基因的农杆菌共培养，遗传转化烟草叶片，筛选抗性再生植株。 【内容】：1、烟草无菌苗的准备 2、带有外源基因农杆菌的培养 3、烟草叶片与对数生长期农杆菌的共培养 4、抗性再生植株的筛选 【用具】：超净工作台、摇床、恒温培养室、高压灭菌器、冰箱、培养
转基因植物的研究主要在于改进植物的品质，改变生长周期或花期等提高其经济价值或观赏价值；作为某些蛋白质和次生代谢产物的生物反应器，进行大规模生产；研究基因在植物个体发育中，以及正常生理代谢过程中的功能。 以植物作为生物技术的实验材料有其特定的优点，那就是植物细胞大部分都有全能性 (totipotency) ，可以用单个细胞分化发育出整个植株。这样，经过基因工程改造的单个植物细胞有可能再生成一棵完整的转基因植株。这些植株还可通过有性生殖过程把改变了的性状遗传给下一代
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