实验试剂 发根农杆菌 发根农杆菌C58C1

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C58C1发根农杆菌使用方法

1. 简要介绍

本菌种来源于C58C1,发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。

菌种名	C58C1发根农杆菌
拉丁名	Agrobacterium rhizogenes
编号
代数	2代
运输形式	穿刺接种方式，固体培养基上生长
特征	诱导毛状根，具有Rif抗性。
保存	含30%甘油菌液放于-80度可长期保存
培养基	YEB培养基

2. 使用方法

（1）发根农杆菌（20μg/ml Rif）培养基配方：Tryptone 5g, Yeast extract 3g,补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌。配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌。每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。待培养基温度至40℃以下，加入无菌抗生素至浓度（20μg/ml Rif）。
（2）用接种环接种至3mL 发根农杆菌（20μg/ml Rif）液体培养基中28度培养至OD600=0.50，按照照1：1的体积比加入50%甘油，按照每管200ul的量分装至1.5 mL的EP管中，-80度保存。
（3）按照10%的接种量接种至100 mL 发根农杆菌（20μg/ml Rif）液体培养基中28度培养至OD600=0.50，按照1：1的体积比加入50%甘油，按照每管1mL的量分装至1.5 mL的EP管中，-80度保存。
（4）我们推荐保存2代，视为安全保菌方式。

目前采用的发根农杆菌主要有天然农杆碱型的A4、ATCCl5834、16834、LBA9402及

1601、R1000、R1200等人工构造质粒；还有黄瓜碱型的2635、2657、2659等；以及

甘露碱型的5196、TRl01、TR7等，每一种菌株对不同植物的发根能力是不同的。