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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
4℃无菌
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海瑞楚生物
弗氏不完全佐剂(Freund’s Adjuvant Imcomplete)
说明书
1 本品简介
弗氏佐剂(Freund adjuvant),这是目前最常用于动物实验的佐剂,它是将油剂石蜡油与乳化剂羊毛脂制成按照一定比例制成的乳剂,称之为不完全弗氏佐剂。如在不完全佐剂中加入分枝杆菌(如死卡苗)则称为完全弗氏佐剂。
2 产品成分
液体石蜡(分析纯级别)、植物油、羊毛脂(药用级别)和叶吐温
3 使用方法
在免疫动物前,先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合,佐剂和抗原体积比一般为1:1,制备成油包水乳状液。一般首次注射时用1/2体积FCA加上1/2体积的抗原进行乳化,第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。如不加佐剂,则抗原量增大10-20倍。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物,注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异,无统一标准和固定模式。一般是每兔(约2kg重)或每羊(约20kg重)第1次注射抗原1mg,以后逐次增加抗原量,最多每次不超过3mg。佐剂与抗原乳化可按如下方法进行:
(1)研磨法:先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内,待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液,边滴边按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,继续研磨一段时间,使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。本法适于制备大量的佐剂抗原,缺点是研钵壁上粘附大量乳剂,抗原损失较大。
(2)注射器混合法:将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内,两注射器之间以一细胶管相连,注意排净空气,然后交替推动针管,直至形成粘稠的乳剂为止。本法优点是容易做到无菌操作,抗原损失少,适用于制备少量的抗原乳剂。但同时难以乳化完全,个别抗原,用塑料注射器根本推不动,而用玻璃注射器又有渗漏。制备好的乳化剂经鉴定才能适用。鉴定方法是将乳化剂滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴状浮于水面,即乳化完全,为合格的油包水剂。
(3) 超声:实验室条件好点的,比如说有超声破碎仪的,一定要控制超声频率和时间,超声容易激发一些自由基,对抗原有未知损害。乳化方法要根据抗原和需要而定。
4 储存 4度无菌条件下,可保存一年。
5 安全说明 本品仅可用于实验,不可用于临床和人体试验。
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文献和实验沉淀洗涤三次,每次2000r/min,离心10min,然后去掉上清液,血球泥用生理盐水配成2.50%液应用。2、溶血素效价测定 溶血素是用绵羊红细胞,经多次免疫家兔,抽取家兔血清,加入甘油而成。在冰箱中可保存二年以上。每隔两、三个月测定效价一次。溶血素可从生物制品厂购买。溶血素效价测定的方法:先将溶血素稀释成100倍,即0.20ml的溶血素(溶血素实量含0.10ml)加入9.80ml生理盐水混合即可。然后按表1配成稀释液:表1 溶血素稀释表稀释
②乙液的配制去氧胆酸钠 10g蒸馏水 100mL②Andrade指示剂酸性复红 0.5g1mol/L氢氧化钠溶液 16mL蒸馏水 100mL将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1~2mL。 46 SS琼脂基础培养基:牛肉膏 5g眎胨 5g三号胆盐 3.5g琼脂 17g蒸馏水 1000mL 再将两液混合,121℃高压灭菌15min,保存备用。完全培养基:基础培养基 100mL乳糖 10g柠檬酸钠 8.5g硫代硫酸钠 8.5g10%柠檬酸铁溶液 10mL
超纯水溶解, 定容至10ml。⑶溴酚蓝指示剂:50%甘油, 0.4%溴酚蓝, 加超纯水配制而成。配制分离胶和浓缩胶10%的分离胶由30%丙烯酰胺、分离胶缓冲液、TEMED和10%APS加超纯水配制而成。将电泳模具垂直放置,两边和底用10%琼脂糖密封,把配制好的分离胶从顶部灌入模具。迅速小心地在分离胶表面加一层超纯水,封住胶面,以促使聚合并使凝胶表面平直。凝胶在37℃恒温箱中放置1小时后,可以观察到出现水、胶分离的界面表示凝胶已聚合。吸去水,用浓缩胶缓冲液淋洗凝胶。4%浓缩胶由30%丙烯酰胺、浓缩
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