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- 酵母四杂交系统的原理是在酵母双杂交系统的基础上改进的，用来验证RNA与RNA互作分析；从本质上来说，在质粒构建过程中就是比酵母双杂交系统多了一个基因表达框。
- 2026年04月24日
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RNA杂交
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广州伯信生物科技有限公司
从原理和技术路线上是将两个已知的RNA结合蛋白分别与转录因子的DNA结合domain(如LexA)和激活结构域(activation domain)分别构建融合蛋白。此外构建两个杂合RNA，各自含有二个不同的结合位点，其中一个结合位点是与已知的RNA结合蛋白结合的颈环序列。当RNA与RNA相互作用时可激活报道基因的转录和表达。
① RNA结合蛋白选用噬菌体MS2被壳蛋白(MS2 coat protein)，MS2 coat protein可识别RNA中的21nt的茎环序列，并与之有较高的亲和力。
② 实验中需要用2个质粒表达杂合RNA，一个含有MS2 coat protein结合位点、另一个含有RNA类型的转录激活标签m26。
客户提供
① 互作RNA物种、名称、序列、基因ID；
② 突变位点序列信息。
伯信提供
① 检测报告（实验仪器、试剂、方法、结果、结论）；
② 载体构建过程图，测序结果；
③ 互作分析结果。
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文献和实验RNA 点线杂交（ Dot and Slot blotting ） ・ RNA dot blot and slot blot ( Beverly Faulkner-Jones) This methods allows the rapid analysis of numerous small samples for the sequence of interest and is less time consuming
RNA 点杂交 1） 纯化的 RNA 的点杂交和狭线杂交 安装印迹装置 1． 切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿，在 20 × SSC 中室温泡 1 h 。 2． 在膜浸泡期间，先用 0.1 mol/L NaOH 小心清洗印迹装置，再用无菌水洗干净。 3． 把两片厚滤纸用 20 × SSC 浸湿，再放到
1hr左右，至溴酚兰离点样孔约3.5-4cm（凝胶在紫外灯下可看到28S和18S刚好分开即可） 6.转膜：转膜液用500ml 4×SSC加27ml 37%甲醛（终浓度为2%）；转膜步骤同Southern。注意加溶液后一切操作均在通风橱内进行，以避免甲醛对人体的伤害 7.照相：将胶及膜取下，分别在凝胶成像系统下看胶上RNA是否有残留，膜上RNA效果是否完好。 8.风干：在超净工作台上吹干。 9.固定：于紫外交联仪内以1200 ENERGY照一次约半分钟，再重复一次，再在超净工作台上吹干
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