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miaolingbio
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文献和实验转录因子表达情况，操作过程跟ELISA实验差不多，结果数值化呈现，判读更直观、分析更简单。用这个做就更有针对性一点，只做常见的转录因子，后续的实验安排也更有针对性。 加“分”Step 3 ● 高通量筛查后，通常要对表达差异的转录因子进行验证。 ● 验证方法很多，包括转录因子滤板法、EMSA、ELISA以及荧光素酶报告载体等。 ● 特别推荐一种适用于大量样本检测的“转录因子滤板法检测试剂”，一次实验可以检测96个样本中的转录
再登《Cancer Research》！金开瑞双荧光素酶报告系统助力机制研究新突破
。根据研究需求，双荧光素酶报告基因实验可广泛应用于以下领域： 应用场景 说明 转录因子-启动子互作验证 将启动子序列构建于Luc上游，共转染转录因子，检测Luc活性变化 miRNA-靶基因互作验证 将靶基因3‘UTR构建于Luc下游，共转染miRNA，检测Luc活性是否下降 启动子活性/SNP功能分析 构建启动子截短或突变体，比较不同区域的转录调控活性 信号通路响应元件分析 将通路响应元件构建至报告载体，检测通路激活/抑制对转录活性的影响
报告质粒加入过多可能影响Firefly表达，因此内参量需要通过预实验确定。 图2丨双荧光素酶报告基因实验检测原理 二、实验设计：先把报告载体和对照组配完整 1. 转录因子调控实验同时设置WT和MUT 验证转录因子是否通过特定启动子或增强子位点发挥作用时，建议同时设置野生型报告载体（WT）和关键结合位点突变载体（MUT）。 WT与MUT的主要差异应集中在预测结合位点，载体构建完成后通过Sanger测序确认插入方向和突变序列。结果分析时重点比较转录因子对WT和MUT报告
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