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- 2026年08月03日
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miaolingbio
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文献和实验Generation of Recombinant Adenovirus Using the Escherichia coli BJ5183 Recombination System
here uses homologous recombination machinery of Escherichia coli BJ5183 to construct plasmids used in generation of adenoviral vectors. With this method, no ligation steps are involved in generating the plasmids, and any region of the adenoviral genome
1、准备工作1.1 将水浴箱内部清洁干净后放入无盐水至标示刻度。1.2 将盛有所需溶液的1000ml烧杯放入水浴箱中。1.3 将吊篮悬挂于金属支架上，调节水位高度，使吊篮上升时筛网在水面下25mm处，下降时距底25mm，然后取下吊篮备用。2、正常工作2.1 插上电源，然后按电源开关接通电源，电源指示灯亮，仪器启动。2.2 时间预置仪器开机后，系统处于初始状态，自动定时系统自动预置为15秒，时间数码管显示窗显示时间数值为015。如果需要改变预置时间数值，则可以按一下时间键，预置时间数值变为20
（细菌内同源重组AdEasy System）一、目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例）步骤1、选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2、重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。3、重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。4、用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。5、胶回收线性化质粒，以备共转化使用。二、共转化 1、大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 （1）从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌，接种于LB
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