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miaolingbio
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淼灵生物
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文献和实验子CaMKIIa,星型胶质细胞特异性启动子GfaABC1D,心肌特异性启动子cTNT,肝实质细胞特异性启动子TBG等。(2) 荧光:针对编码蛋白,常规推荐目的基因和荧光蛋白非融合表达,通过荧光观察感染效率。若需要用荧光标记目的基因的位置,如亚细胞定位等实验时可考虑做目的基因和荧光蛋白融合表达。因蛋白均有自己的空间结构,若选择融合表达,两个蛋白可能会相互影响。融合表达常用结构:非融合表达常用结构:(3) 抗性:A 常用原核抗性:Amp,Kan。B 常用真核抗性:Puro,blasticidin(BSD,BSR
性维持 → 确定工作浓度 快速版: 载体带 Puro 抗性 → puromycin,多数细胞 1~10 μg/ml 载体带 Neo 抗性 → G418,浓度范围更大,筛选周期更长 载体带 Bsd 抗性 → blasticidin,起效快、用量低 双载体系统(如 Cas9 + sgRNA)→ 两种抗生素同时维持,各取筛选浓度的 1/2~1/4 或更低 --- 一、三种常用抗生素对比 Puromycin(嘌呤霉素) Neomycin/G418 Blasticidin(杀
Retroviral infection of primary human keratinocytes (PHKs)
to be low, infect again today and begin selection on day 5 Selection of PHKs G418 only : use 150µg/mL in KGM. Check each day. Puro only : try 1µg/mL G418 + Puro : try 50µg/mL G418 + 0.4µg/mL puro
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