五、植物表达载体pCAMBIA1301

植物基因工程表达载体的改进和优化策略

将特定的外源基因构建在植物表达载体中并转入受体植物，并不是植物遗传转化的最终目的。理想的转基因植物往往需要外源基因在特定部位和特定时间内高水平表达，产生人们期望的表型性状。然而，近二十年的发展历史却表明，外源基因在受体植物内往往会出现表达效率低、表达产物不稳定甚至基因失活或沉默等不良现象，导致转基因植物无法投入实际应用。另外，转基因植物的安全性问题已在许多国家引起人们的关注，例如，转基因有可能随花粉扩散，抗生素筛选标记基因有可能使临床上的某些抗生素失去作用等等。以上问题的出现使得植物

RNAi技术专题之：体外转录合成双链RNA

突变和化学修饰的耐受性，认为siRNA的5’端相对于3’端具有对突变的较高耐受性。有学者认为正义链3’突出端的任何碱基修饰对siRNA作用效果均无明显影响。还有学者认为与反义链互补的正义链3’端发生1—4个碱基的错配反而有助于增强RNAI的活性。二、siRNA制备方法目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括化学合成体外转录长片断dsRNAs经RNase III 类降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III)siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAsPCR制备

基因重组中的关键反应和机制讲解【图文并茂版】

的目的基因来进行结构与功能的研究。 重组DNA技术的另一目的是获得基因重组后的产物——RNA，蛋白质。 就是将目的基因与表达载体重组，导入宿主细胞进而表达出相应的基因产物(蛋白)。 如胰岛素，干扰素;生产疫苗的抗原和特异的抗体等。此类克隆系统称为表达克隆。(expression cloning). 目的基因表达 真核细胞的基因在原核细胞 (细菌)中表达 原核细胞中缺乏真核基因表达装置(如，RNA剪接因子等)，因此不能直接表达。通常采用大肠杆菌为宿主。 真核多肽的表达要求