EMSA探针-CREB

电泳迁移实验(EMSA)方法

改善EMSA的电泳结果。如需纯化，可以按照如 下步骤操作：（1） 对于100微升标记好的探针，加入1/4体积即25微升的5M醋酸铵，再加入2体积即200微升的无水乙醇，混匀。（2） 在-70℃至-80℃沉淀1小时，或在-20℃沉淀过夜。（3） 在4℃，12, 000g-16, 000g离心30分钟。小心去除上清，切不可触及沉。（4） 在4℃，12, 000g-16, 000g离心1分钟。小心吸去残余液体。微晾干沉淀，但不宜过分干燥。（5） 加入100微升TE，完全溶解沉淀。标记好的探针最好立即使用

凝胶迁移实验（EMSA）实验方法

凝胶迁移实验有称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验（EMSA，electrophoretic mobility shift assay），是一种用于蛋白与核算相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验，也可应用与蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。 一、实验原理 EMSA主要基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。根据实验设计特异性和非特异性探针，当核酸探针与样本蛋白混合孵育时，样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物；这种复合

做STAT3及pSTAT3的WB如何提蛋白？

细胞核内，和相关靶基因结合，启动靶基因转录，因此一般情况下是提取核蛋白，westblotting检测磷酸化的stat蛋白才有意义，而STAT总蛋白是没有变化的。当然要检测stat－DNA的结合活性，目前通常采用的方法是EMSA，或者CHIP。 Rachel1123 谢谢二位！ bestchenyao CREB 提取也是这样吗 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴