- ￥185 - 12755
- 翌圣生物（Yeasen）
- 上海
- 11203ES
- 2025年10月15日
企业认证
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![探针法2×实时定量PCR扩增预混液 qPCR TaqMan Probe Master Mix[可申请试用]](https://img1.dxycdn.com/2019/0531/479/3348497731122979574-14.jpg!wh200)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃避光储存
- 保质期：
有效期18个月
- 英文名：
Hieff qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox Plus)
- 库存：
大量
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
1 mL(11203ES03)/5×1mL(11203ES08)/100×1mL(11203ES60)/50×1mL(11203ES50)
| 规格： | 1 mL(11203ES03) | 产品价格： | ￥185.00 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 5×1mL(11203ES08) | 产品价格： | ￥745.00 |
| 规格： | 100×1mL(11203ES60) | 产品价格： | ￥12755.00 |
| 规格： | 50×1mL(11203ES50) | 产品价格： | ￥6755.00 |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(High Rox Plus)是2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。Mix中含有热启动Hieff® DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+及High Rox。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光定量PCR，大大简化操作过程，降低污染几率。
本品采用的DNA聚合酶配体可以随温度变化实时调节DNA聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。
适用机型
Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT FAST, StepOne, StepOne Plus.
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃避光储存，有效期18个月。
本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存或配制反应体系时需避免强光照射。
注意事项
1. 解冻后Master Mix可能出现絮状物质，4℃放置并上下颠倒混匀至溶液澄清，不影响试剂性能。
2. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒（货号：11123ES），以有效去除RNA样品中残留的基因组。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
4.本产品仅作科研用途！
反应体系（推荐冰上配置）
|
组分 |
体积（μl） |
体积（μl） |
终浓度 |
|
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox Plus) |
25 |
10 |
1× |
|
Forward Primer (10μM) |
1 |
0.4 |
0.2μM |
|
Reverse Primer (10μM) |
1 |
0.4 |
0.2μM |
|
模板DNA |
X |
X |
- |
|
无菌超纯水 |
to 50 |
to 20 |
- |
【注】： 使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2μM，也可以根据情况在0.1-1.0μM之间进行调整。
b) 模板浓度：如模板类型为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。
c) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。
d) 反应体系：推荐使用20μl或50μl，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
扩增程序 （两步法）
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
5min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
10sec |
40 |
|
退火/延伸 |
60℃ |
30sec★ | |
|
熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 | |
扩增程序（三步法）
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
5min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
10sec |
40 |
|
退火 |
55-60℃ |
20sec | |
|
延伸 |
72℃ |
20sec★ | |
|
熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 | |
【注】高特异性可选择两步法，高效率扩增可选择三步法。
a) 预变性时间：根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至2min。
b) 退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整。
c) 荧光信号采集（★）：请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置，几种常见仪器的时间设定如下：
30sec以上：Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus, 7500 Fast；Roche Applied Science: LightCycler 480；Bio-Rad: CFX96
31sec以上：Applied Biosystems: 7300
34sec以上：Applied Biosystems: 7500
d) 熔解曲线：通常情况下可以使用仪器默认程序。
结果分析
定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。
1) 扩增曲线：标准扩增曲线为S型。
Ct值落在20-30之间时，定量分析最准确；
Ct值小于10，需要将稀释模板后，重新进行实验；
Ct值介于30-35之间时，需要提高模板浓度，或者增大反应体系的体积，以提高扩增效率，保证结果分析的准确性；
Ct值大于35时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。
2) 熔解曲线：
熔解曲线单峰，表明反应特异性好可以进行定量结果分析；若熔解曲线出现双峰或者多峰，则不能进行定量分析。
熔解曲线出现双峰，需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。
如果是引物二聚体，建议降低引物浓度，或者重新设计扩增效率高的引物。
如果是非特异性扩增，请提高退火温度，或者重新设计更高特异性的引物。
引物设计指南
1. 推荐引物长度25bp左右。扩增产物长度150bp为佳，可以在100bp-300bp内选择。
2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
3. 引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
4. 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
5. 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
6. 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测，只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。
HB211207
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文献和实验[1] Yu Y, Zhang B, Ji P, et al. Changes to gut amino acid transporters and microbiome associated with increased E/I ratio in Chd8+/- mouse model of ASD-like behavior. Nat Commun. 2022;13(1):1151. Published 2022 Mar 3. doi:10.1038/s41467-022-28746-2(IF:14.919)
[2] Cao C, Cai Z, Xiao X, et al. The architecture of the SARS-CoV-2 RNA genome inside virion. Nat Commun. 2021;12(1):3917. Published 2021 Jun 24. doi:10.1038/s41467-021-22785-x(IF:14.919)
[3] Wang J, Ge P, Qiang L, et al. The mycobacterial phosphatase PtpA regulates the expression of host genes and promotes cell proliferation. Nat Commun. 2017;8(1):244. Published 2017 Aug 15. doi:10.1038/s41467-017-00279-z(IF:12.124)
[4] Hao JW, Wang J, Guo H, et al. CD36 facilitates fatty acid uptake by dynamic palmitoylation-regulated endocytosis. Nat Commun. 2020;11(1):4765. Published 2020 Sep 21. doi:10.1038/s41467-020-18565-8(IF:12.121)
[5] Shui S, Zhao Z, Wang H, Conrad M, Liu G. Non-enzymatic lipid peroxidation initiated by photodynamic therapy drives a distinct ferroptosis-like cell death pathway. Redox Biol. 2021;45:102056. doi:10.1016/j.redox.2021.102056(IF:11.799)
[6] Li Y, Hu Q, Li W, et al. Simultaneous blockage of contextual TGF-β by cyto-pharmaceuticals to suppress breast cancer metastasis. J Control Release. 2021;336:40-53. doi:10.1016/j.jconrel.2021.06.012(IF:9.776)
[7] Du J, Wang C, Chen Y, et al. Targeted downregulation of HIF-1α for restraining circulating tumor microemboli mediated metastasis. J Control Release. 2022;343:457-468. doi:10.1016/j.jconrel.2022.01.051(IF:9.776)
[8] Zhang Q, Tong J, Zhou W, et al. Antibacterial and antioxidant chitosan nanoparticles improve the preservation effect for donor kidneys in vitro. Carbohydr Polym. 2022;287:119326. doi:10.1016/j.carbpol.2022.119326(IF:9.381)
[9] Sun Q, Ye Y, Gui A, et al. MORTALIN-Ca2+ axis drives innate rituximab resistance in diffuse large B-cell lymphoma. Cancer Lett. 2022;537:215678. doi:10.1016/j.canlet.2022.215678(IF:8.679)
[10] He D, Ma Z, Xue K, Li H. Juxtamembrane 2 mimic peptide competitively inhibits mitochondrial trafficking and activates ROS-mediated apoptosis pathway to exert anti-tumor effects. Cell Death Dis. 2022;13(3):264. Published 2022 Mar 24. doi:10.1038/s41419-022-04639-6(IF:8.469)
%，避免引物内含有互补序列，3』端尽量不要出现含有连续三个以上的 G 或 C 的片段，真核基因设计引物时最好跨内含子哦。 选择合适 ROX 参照染料 各位同学在选购产品、做实验时，首先要弄清自己实验室的仪器对应哪种 ROX（High 还是 Low）！试剂买回来，样也加好了，最后发现不能用在自家仪器上，内心也一定是很崩溃。诺唯赞的染料法荧光定量专用预混液提供各种 ROX 供选择，如果不想这么麻烦，ChamQTM Universal SYBR® qPCR Master Mix （Q711）那是极好
PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束
Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
或者 Premixture 里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加 ROXTM 染料校正。 通常来讲，real-time qPCR 的反应程序不需要像常规的 PCR 那样，要变性、退火、延伸 3 步。由于其产物长度在 80-150 bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR @Green 等染料法，最好在 PCR 扩增程序结束后，加一个溶解程序，来形成溶解曲线，判断PCR产物的特异性扩增。而溶解程序，仪器都有默认设置，或稍有不同，但都是一个在产物进行溶解时候，进行荧光信号的收集
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