- ￥498
- 翌圣生物（Yeasen）
- 上海
- 11201ES08
- 2025年11月10日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
20℃避光储存
- 保质期：
有效期1年
- 英文名：
Hieff qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox Plus)
- 库存：
大量
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
5×1ml
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） | 回报价（元） |
| HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox) | 11201ES03 | 1ml | -20℃避光 | 180.00 | 180.00 |
| 11201ES08 | 5×1ml | -20℃避光 | 740.00 | 498.00 | |
| 11201ES60 | 20×5ml | -20℃避光 | 12877.00 | 5980.00 |
HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix(No Rox)是2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。Mix中含有热启动HieffTM DNA Polymerase、SYBR® Green I、dNTPs、Mg2+。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光定量PCR，大大简化操作过程，降低污染几率。
本品采用的DNA聚合酶配体可以随温度变化实时调节DNA聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。
适用机型
Bio-Rad: CFX96TM, CFX384TM, iCycler iQTM, iQTM5, MyiQTM, MiniOpticonTM, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4TM;
Eppendorf: Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000;
Roche Applied Science: LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler®; Illumina: Eco qPCR.
反应体系（推荐冰上配制）
| 组分 | 体积（μl） | 体积（μl） | 终浓度 |
| HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox) | 25 | 10 | 1× |
| Forward Primer (10μM) | 1 | 0.4 | 0.2μM |
| Reverse Primer (10μM) | 1 | 0.4 | 0.2μM |
| 模板DNA | X | X | - |
| 无菌超纯水 | to 50 | to 20 | - |
a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2μM，也可以根据情况在0.1-1.0μM之间进行调整。
b) 模板浓度：如模板类型为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。
c) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。
d) 反应体系：推荐使用20μl或50μl，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
扩增程序 （本产品可适用三步法和两步法程序）
三步法程序
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 10sec | 40 |
| 退火 | 55-60℃ | 20sec | |
| 延伸 | 72℃ | 20sec | |
| 熔解曲线 | 95℃ | 15sec | 1 |
| 60℃ | 60sec | ||
| 95℃ | 1 |
两步法程序
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 10sec | 40 |
| 退火、延伸 | 60℃ | 30sec | |
| 熔解曲线 | 95℃ | 15sec | 1 |
| 60℃ | 60sec | ||
| 95℃ | 15sec
|
【注】：
a) 预变性时间：根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至2min。
b) 退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整。
c) 荧光信号采集：请参考仪器设置。
d) 熔解曲线：通常情况下可以使用仪器默认程序。
结果分析
定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。
1) 扩增曲线：标准扩增曲线为S型。
- 值落在20-30之间时，定量分析最准确；
- 值小于10，需要将稀释模板后，重新进行实验；
- 值介于30-35之间时，需要提高模板浓度，或者增大反应体系的体积，以提高扩增效率，保证结果分析的准确性；
- Ct值大于35时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。
- 熔解曲线单峰，表明反应特异性好可以进行定量结果分析；若熔解曲线出现双峰或者多峰，则不能进行定量分析。
- 熔解曲线出现双峰，需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。
- 如果是引物二聚体，建议降低引物浓度，或者重新设计扩增效率高的引物。
- 如果是非特异性扩增，请提高退火温度，或者重新设计更高特异性的引物。
引物设计指南
1. 推荐引物长度25bp左右。扩增产物长度150bp为佳，可以在100bp-300bp内选择。
2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
3. 引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
4. 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
5. 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
6. 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测，只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。
注意事项
1. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒（货号：11104），以有效去除RNA样品中残留的基因组。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃避光储存，有效期1年。
本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR® Green I，保存或配制反应体系时需避免强光照射。
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货号 |
规格 |
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5 ml |
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- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验[2] Wan S, Ni L, Zhao X, et al. Costimulation molecules differentially regulate the ERK-Zfp831 axis to shape T follicular helper cell differentiation. Immunity. 2021;54(12):2740-2755.e6. doi:10.1016/j.immuni.2021.09.018(IF:31.745)
[3] Han X, Wang R, Zhou Y, et al. Mapping the Mouse Cell Atlas by Microwell-Seq [published correction appears in Cell. 2018 May 17;173(5):1307]. Cell. 2018;172(5):1091-1107.e17. doi:10.1016/j.cell.2018.02.001(IF:31.398)
[4] Tang Y, Fang G, Guo F, et al. Selective Inhibition of STRN3-Containing PP2A Phosphatase Restores Hippo Tumor-Suppressor Activity in Gastric Cancer. Cancer Cell. 2020;38(1):115-128.e9. doi:10.1016/j.ccell.2020.05.019(IF:26.602)
[5] Chang D, Xing Q, Su Y, et al. The Conserved Non-coding Sequences CNS6 and CNS9 Control Cytokine-Induced Rorc Transcription during T Helper 17 Cell Differentiation. Immunity. 2020;53(3):614-626.e4. doi:10.1016/j.immuni.2020.07.012(IF:22.553)
%，避免引物内含有互补序列，3』端尽量不要出现含有连续三个以上的 G 或 C 的片段，真核基因设计引物时最好跨内含子哦。 选择合适 ROX 参照染料 各位同学在选购产品、做实验时，首先要弄清自己实验室的仪器对应哪种 ROX（High 还是 Low）！试剂买回来，样也加好了，最后发现不能用在自家仪器上，内心也一定是很崩溃。诺唯赞的染料法荧光定量专用预混液提供各种 ROX 供选择，如果不想这么麻烦，ChamQTM Universal SYBR® qPCR Master Mix （Q711）那是极好
PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束
真香！用 qPCR 做外泌体研究，南京医科大学拿下 41 分 SCI
等）、miRNA 加尾法逆转录试剂盒做反转录：适用于短片段 RNA（主要为 miRNA）的加尾法。 4）qPCR 检测 采用 Umibio 2×SYBR Green qPCR 试剂：预混 ROX1 型适用于 ABI 5700 等设备、预混 ROX2 型适用于 ABI 7500 等设备。 5）数据分析：采用仪器自带的 QPCR 分析软件进行数据分析 可以看到 qPCR 检测外泌体可行且可靠，但实验过程并不简单，因此我们对经常会遇到的问题及解答也进行了整理，帮助大家更好的完成实验。 qPCR检测外泌常见问题及解决
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