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名称:Stbl3化学感受态细胞
品牌:淼灵生物
货号:CCell30041
规格:100ul/管
储存温度:-80℃
基因组:
F- glnV44 recA13 mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 xyl-5 leu mtl-1
产品简介:
Stbl3菌株来源于 HB101 E. coli strain,是慢病毒载体系统推荐使用的菌株。基因组含有重组酶recA13突变,可有效抑制长片段末端重复区的重组,降低错误重组的概率;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有链霉素抗性;不存在lacIqZΔM15,不可用于蓝、白斑筛选。
来源于HB101菌株。能够有效扩增慢病毒载体上的重复序列DNA,是进行慢病毒载体构建时的高效克隆菌株。
操作说明:
1,收到本产品请直接冻存于-80℃冰箱备用。
2,取冻存于-80度冰箱的100μl感受态细胞于冰上融化。
3,加入1μl纯质粒或10ul连接产物,轻轻吹打混匀,冰浴30 min。
4,将菌液放入42℃水浴中热激90秒,立即放入冰浴中5 min。
5,加入800ul LB,于37℃恒温摇床上150rpm×45min温育。
6,将菌液4000rpm/min离心3min,留200μl上清将菌体打散,均匀涂布于含适当浓度的相应抗生素的琼脂平板表面,平板于37℃可先正放置1h,待液体吸收完毕,再倒置培养过夜。
注:①:新倒的平板可于37℃培养箱中预先放置至干燥。
②:当转化的是TA克隆连接产物时可在菌液中加入8μl 1M IPTG和40μl 20mg/ml X-gal以进行蓝白斑筛选。
注意事项:
1,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2,本品仅可用于实验室研究,不能用于动物,人体以及作为食品添加剂等用途。
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文献和实验The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" Cells Joseph Sambrook Peter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne
摘要: 有人提出, 冻存后转化效率降低且这种方法不适合大质粒.以下转贴为coli感受态细胞制备方法,具体方法请最好查阅文献. 摘要: 但有人提出, 冻存后转化效率降低, 且这种方法不适合大质粒.以下为转贴,具体方法请最好查阅文献E.coli 感受态细胞 制备方法:单菌落平板至2ml LB, 37 oC 250 r/m ovn
to an ice bath. 10. Distribute aliquots 100 µl with chilled, sterile pipette tip into chilled 1.5 ml microcentrifuge tubes. 11. Flash freeze in liquid nitrogen, then place at -70°C. 如果用来建库或者转化比较珍贵的材料可以试一下这种感受态!效率非常高! 更多相关链接(生物谷) 试剂
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