pHT01 枯草芽孢杆菌表达质粒

【交流】构建ShRNA表达质粒咋就那么难？

到医院实习之前，我有幸跟随我的恩师，利用课余时间做了两年多的基础科研。从不懂规矩到渐入佳境，期间学习了很多东西，在此感谢我的恩师！ 我们是生物化学教研室，这两年的时间里我做了很多生化方面的实验。像细菌培养、细胞培养、PCR、western-blot、MTT测细胞增殖能力，这些实验都有商品化的试剂和推荐的操作方法，做起来，难度并不大。唯独让我感到苦恼的就是ShRNA表达质粒的构建这部分，它耗费了我们很多的精力，虽然最终取得了成功，也发表了论文。但是显然，这个实验的可重复性并不

蛋白分泌表达，枯草芽孢杆菌帮你忙

等遗传操作，然后转入枯草芽孢杆菌进行外源基因的表达。AtaGenix使用的pHT系列载体拥有枯草芽孢杆菌的σA-依赖性的强启动子，配以groE启动子和lac操纵子，能够通过IPTG诱导来启动外源基因的表达。通过添加枯草芽孢杆菌中编码α-淀粉酶的amyQ基因的信号肽编码区域，构成了能够将目标蛋白有效分泌至胞外的表达载体，如pHT43。   3 有效的转化手段 枯草芽孢杆菌早期比较通用的转化方法是Spizizen转化法（接合转化），但在枯草芽孢杆菌的生长周期中能自发

更快克隆出重组表达质粒

比起其它公司的原核表达系列来说Invitrogen有个非常突出的地方就是它的重组克隆技术。像之前Novagen大部分载体都是用传统的酶切、链接方式做重组质粒，但是Invitrogen的表达系统大量运用了它的TOPO技术和Gateway技术。 虽然现在在许多做科研的学生看来，能出实验结果是最重要的，中间的过程不是那么重要。可是只有创新的技术才能推动科学不断的进步，比如：如果我们一直采用手工法测序，那真是不知道要猴年马月才能有人类基因组测序图谱，更难以进行