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- YB10112ES03
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
密封干燥保存
- 保质期：
6个月
- 英文名：
2×Hieff™ HotStart PCR Master Mix (No Dye)
- 库存：
1000
- 供应商：
钰博生物
2×HieffTM HotStart PCR Master Mix是即用型的PCR预混合溶液，含有HotStart DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。Mix中不含染料，其中的保护剂使得Mix经过反复冻融后仍可维持酶的活性以及产品的稳定性。PCR产物具有3’-dA突出端，可轻松克隆至T载体。
2×Hieff™ HotStart PCR Master Mix (No Dye)产品信息
编号
组 分
产品编号/规格
10112ES03(1ml)
10112ES08(5×1ml)
10112-A
2×HieffTM HotStart PCR Master Mix (No Dye)
1ml
1 ml×5
10112-B
超纯水（PCR Grade）
1ml
1 ml×5
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子作为模板/引物，在74ºC，30min内摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸外内酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时, DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl体系中，以30 pg人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。35个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的360 bp条带。
应用实例
1. 反应体系配制（50μl）：
模板DNA§
optional
引物1（10 μM）
2 μl
引物2（10 μM）
2 μl
2×HieffTM HotStart PCR Master Mix (No Dye)
25μl
ddH2O
up to 50μl
§ 针对不同模板的最佳反应浓度有所不同，下表为50μl反应体系推荐模板使用量，仅供参考。
人基因组DNA
1～500 ng
大肠杆菌基因组DNA
1～100 ng
λDNA
0.1～1 ng
质粒DNA
0.1～1 ng
2. PCR循环反应条件
95℃
5 mina（预变性）
95℃
30 sec
35个循环
55℃b
30 sec
72℃
60 sec/kb
72℃
7min（彻底延伸）
a. 如扩增不理想，可适当延长95℃预变性时间，最长可至10 min。
b. 退火温度需要根据引物的Tm值调整，一般设置成低于引物Tm值1-2℃即可。
2×Hieff™ HotStart PCR Master Mix (No Dye)引物设计注意事项
1. 引物3’端最后一个碱基选择C或G；
2. 引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3. 引物3’端尽量避免发卡结构的出现；
4. 引物Tm值控制在55℃-65℃之间；
5. 引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6. 引物GC含量控制在40%-60%之间；
7. 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。
2×Hieff™ HotStart PCR Master Mix (No Dye)yb-axbz-164 鼠胚成纤维细胞系 STO 规格25毫升/株.
yb-axbz-165 鼠乳腺癌细胞系 MA-782 规格25毫升/株.
yb-axbz-166 鼠成纤维细胞系 GR 规格25毫升/株.
yb-axbz-167 杂交瘤细胞枝原体阳性 B6YH4 规格25毫升/株.
yb-axbz-168 鼠细胞系 B82 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
yb-axbz-169 兔肾细胞系 RK-13 规格25毫升/株.
yb-axbz-170 猴肾细胞系 MA-104 规格25毫升/株.
yb-axbz-171 VERO衍生株 SVP 规格25毫升/株.
yb-axbz-172 猪肾细胞系 PK-15 规格25毫升/株.
yb-axbz-173 猪肾细胞系 IBRS-2 规格25毫升/株.
yb-axbz-174 草鱼肾细胞系 GIK 规格25毫升/株.
yb-axbz-175 昆虫细胞系 Sf-21 规格25毫升/株.
yb-axbz-176 昆虫细胞系 SF-9 规格25毫升/株.
yb-axbz-177 草鱼肝脏细胞 L8824 规格25毫升/株.
yb-axbz-178 草鱼肾脏细胞 CIK 规格25毫升/株.
yb-axbz-179 团头鲂尾鳍细胞 WCF 规格25毫升/株.
yb-axbz-180 白鲢尾鳍细胞 SCF 规格25毫升/株.
yb-axbz-181 散鳞镜鲤尾鳍细胞 规格25毫升/株.
yb-axbz-182 鲤鱼尾鳍细胞 规格25毫升/株.
yb-axbz-183 转化的豚鼠胎体细胞 104C1 规格25毫升/株.
yb-axbz-184 中国仓鼠肾细胞(二氢叶酸还原酶缺陷型) CHO/dhFr- 规格25毫升/株.
yb-axbz-185 大鼠乳腺腺癌细胞系 MADB106 规格25毫升/株.
yb-axbz-186 鼠肉瘤细胞 S-180-S2D9 规格25毫升/株.
yb-axbz-187 鼠肝癌细胞 H22-H8D8 规格25毫升/株.
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文献和实验-crack to help liberate the DNA. Check that the solution actually freezes. Overlay with a drop of mineral oil and incubate at 60°C for 60 minutes, followed by 95°C for 15 minutes. Cool to 4°C. Pipette 22.5 l of PCR master mix
-crack to help liberate the DNA. Check that the solution actually freezes. Overlay with a drop of mineral oil and incubate at 60°C for 60 minutes, followed by 95°C for 15 minutes. Cool to 4°C. Pipette 22.5 l of PCR master mix
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