Kinetic Turbidimetric LAL Ass

Kinetic Turbidimetric LAL Assays动态浊度法内毒素检测鲎试剂产品描述

鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品，鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。

动态浊度法内毒素检测鲎试剂（Kinetic Turbidimetric LAL Assays）通过检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度来检测内毒素的方法。在适宜的条件下（温度，pH 值及无干扰物质），细菌内毒素激活C因子，引起一系列酶促反应，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。随着凝胶的形成，反应液的吸光度(OD值，浊度)增加，OD值增加的速度与内毒素浓度成正相关。换言之，OD值上升某一预设限值(启动OD)所需要的时间(定义为启动时间)与内毒素浓度成负相关，启动时间的对数与内毒素浓度的对数成线性关系，据此，可以定量供试品的内毒素浓度。
Kinetic Turbidimetric LAL Assays动态浊度法内毒素检测鲎试剂
运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到4ºC，避光保存。

注意事项

1) 该试剂盒用于体外细菌内毒素的定量检测，严禁试剂以任何途径进入机体。

2) 接触试剂及供试品的所有器皿必须是除热原的。试验过程应防止微生物的污染。

3) 该说明书中的除热原指内毒素浓度小于0.005 EU/ml。

4) 供试品的pH 值应在6.0-8.0 之间，若超出此范围，需用除热原的缓冲液、0.1M 氢氧化钠或0.1M盐酸调节。

5) 当供试品中可能存在鲎试验的干扰物质时，须进行干扰试验，参见【供试品的干扰试验】。

所需材料和设备

1. 试剂：内毒素工作标准品、鲎试剂、细菌内毒素检查用水。

2. 器材：

除热原试管、除热原吸头、除热原加样槽、除热原96孔微板。

旋涡混合器、移液器、多道移液器、试管架。

带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件，例如，微板鲎试仪ELx808及软件TALgent 或Gen5。

操作方法

1.动态光度测定仪器的设定，以微板鲎试仪ELx808为例：

预热仪器， 设置温育温度为37℃。

设置模板及程序。

设定读板波长为340nm，设定动力学参数：读板120分钟， 每30秒读一次。

2.内毒素标准溶液配制

1)标准曲线所采用的内毒素浓度可以为2 至10 倍稀释的系列 (如0.5，0.25，0.125，0.0625EU/ml 或10，1，0.1，0.01EU/ml))。

2)取内毒素工作标准品1支，用砂轮沿安瓿颈部划痕，开启，加入适量（建议在0.5 ml - 1.2 ml之间）细菌内毒素检查用水，置旋涡混合器上剧烈振摇5分钟。

3)将上述内毒素溶液进一步用细菌内毒素检查用水稀释成所需浓度，每稀释一步均应在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟。

稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟，用前在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟，放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。(参见《内毒素工作标准品使用说明书》)。

3.阴性对照为细菌内毒素检查用水。

4. 鲎试剂的溶解：按标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中，轻轻振摇使鲎试剂完全溶解。注意不要用旋涡混合器剧烈振摇。溶解的鲎试剂应在10分钟内使用。

若采用多道移液器，将溶解的鲎试剂转移到除热原加样槽，并轻轻摇匀。

5. 实验操作（微板鲎试仪ELx808）：

1) 取除热原微板，在各孔中分别加入100μl细菌内毒素检查用水、内毒素标准溶液，或供试品。

2) 将微板放置于鲎试仪中，37℃温育10分钟。

3) 温育结束，用移液器或多道移液器加入100μl 鲎试剂（避免产生气泡!)，中速振摇10 秒混匀，在340nm波长处，每30秒（到60秒）读一次，读板120分钟。

数据处理

设定启动OD(可以设为0.05, 一般可以在0.04到0.06之间)，软件自动给出其启动时间(T)。

建立标准曲线：lgT = b lgC + a，其中T为启动时间，C为内毒素的浓度，b为直线斜率，a为Y轴截距。

当实验数据同时满足如下三个条件时实验才有效：

① 标准曲线的浓度点≥ 3，标准曲线的相关系数r ≤ -0.980，

② 标准曲线最低点的T值小于阴性对照的T值，

③ 供试品平行管的平均值在标准曲线的区间内。

【供试品的干扰试验】

① 当对新药或无内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时，必须进行干扰试验；

② 当鲎试剂、供试品的来源、配方、生产工艺改变，或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，必须重新进行干扰试验；

③ 当供试品中可能存在鲎试验的干扰物质时，须进行干扰试验。

Kinetic Turbidimetric LAL Assays动态浊度法内毒素检测鲎试剂步骤如下：

1) 选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度（设为λm），作为供试品干扰试验中添加的内毒素浓度，如采用标准曲线为10，1，0.1，0.01EU/ml 系列时, 可以用供试品配制0.1EU/ml 内毒素浓度作为实验的供试品阳性对照。

2)用供试品溶液配制浓度为λm 的内毒素溶液（即含λm 内毒素的供试品阳性对照），测量出该溶液的内毒素浓度，称为Cs；

3) 测量出未添加外源内毒素的供试品溶液内毒素浓度，称为Ct；

4)计算该试验条件下的回收率R ＝（Cs–Ct）/λm × 100%

5)当R在50%～200%之间，则认为在此试验条件下供试品溶液不存在明显干扰作用。

6)当R在50%～200%之外，需对供试品进行系列稀释或进行其它处理消除干扰, 每一稀释溶液都重复步骤2-4, 直到内毒素的回收率R在50%～200%之间。选择回收率R最接近100%的稀释倍数进行内毒素检测。
Kinetic Turbidimetric LAL Assays动态浊度法内毒素检测鲎试剂yb0236 人胚肺成纤维细胞 HFL-I
yb0237 人肺成纤维细胞 HFL1
yb0238 人胚肺成纤维细胞 MRC-5
yb0239 人胚肺成纤维细胞 WI-38
yb0240 人正常肺上皮细胞 BEAS-2B
yb0241 人退行性癌细胞 Calu-6
yb0242 人非小细胞肺癌细胞 A549
yb0243 人非小细胞肺癌细胞 NCI-H358
yb0244 人非小细胞肺癌细胞 NCI-H1650
yb0245 人非小细胞肺癌细胞 HCC827
yb0246 人经典小细胞肺癌细胞 NCI-H1688
yb0247 人肺癌细胞(淋巴结转移) NCI-H292
yb0248 人肺癌细胞株 MSTO-211H
yb0249 人肺扁平上皮癌细胞 QG-56
yb0250 人肺鳞癌细胞 SK-MES-1
yb0251 人肺腺癌细胞 LTEP-a-2
yb0252 人肺腺癌细胞 SPC-A-1
yb0253 人肺腺癌 (胸水) Calu-3
yb0254 人肺腺癌细胞 NCI-H1395
yb0255 人高转移肺癌细胞 95-D
yb0256 人大细胞肺癌细胞 NCI-H460 [H460]
yb0257 人肺癌细胞 Calu-1
yb0258 人肺腺癌细胞 NCI-H1975
yb0259 人神经母细胞瘤细胞 IMR-32
yb0260 人大细胞肺癌细胞 NCI-H661
yb0261 人小细胞肺癌细胞 NCI-H446 [H446]
yb0262 人非小细胞肺癌细胞 NCI-H1299
yb0263 人胸膜瘤细胞 SMC-1
yb0264 人横纹肌瘤细胞 A-673
yb0265 人恶性胚胎横纹肌瘤细胞 RD