JC-1 线粒体膜电位荧光探针

JC-1 线粒体膜电位荧光探针产品描述

JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电△Ψm位的理想荧光探针。JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时，只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

JC-1 用于检测细胞的线粒体膜电位时常用的浓度范围为 1～20 µg/ml，对于很多细胞适宜采用的 JC-1浓度为 10 µg/ml。

JC-1 线粒体膜电位荧光探针产品性质

化学名称

5,5‘,6,6’-Tetrachloro-1,1‘,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide

CAS No.

3520-43-2

分子式

C25H27Cl4IN4

分子量

652.23

Ex (nm)

514

Em (nm)

529

结构式





运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。

粉末-20℃干燥避光保存，至少一年有效。储存液分装成单次使用量，-20℃干燥避光保存，避免反复冻融，约一年有效。

JC-1 线粒体膜电位荧光探针使用方法

1. 工作液配制：

1）JC-1粉末（5 mg）：直接加1 ml DMSO到粉末内，室温颠倒混匀使其充分溶解，即得到5 mg/ml的储存液。溶液分装成小量储存于-20℃，避光干燥，避免反复冻融。

2）JC-1储存液（1mg in DMSO）：本品是JC-1的DMSO储存液，浓度为5 mg/ml。使用者需要根据单次用量来分装，-20℃避光干燥，避免反复冻融。

3）工作液配制：将冻存的储存液置于室温充分融化，之后用缓冲液或者预热的培养基直接稀释储存液（5 mg/ml）到需要的工作液浓度，边震荡边稀释，充分混匀。为了去除任何不溶颗粒，建议13,000 x g离心JC-1工作液1 min，小心吸取上清转移到新的管子内。整个过程要避光操作。注意：因JC-1不溶于水，很可能在稀释到工作液的过程中形成聚集颗粒，则建议细胞染色前用离心或者过滤的方法去除这些颗粒后再使用。

2. JC-1染色步骤（流式细胞仪）

1） 于6-，12或24-孔板上进行细胞铺板，密度为5×105 cells/ml。37℃，5%CO2培养箱培养过夜。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。 注：进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106 cells/ml，也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。

2） 取0.5 ml细胞悬液至无菌的离心管内；

3） 室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清。

4） 用0.5 ml JC-1工作液重悬细胞，于37℃，5%CO2培养箱孵育15-30 min；注意：一般情况，15 min足以进行充分的染色。

5） 室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清；

6） 用2 ml细胞培养液或者缓冲液重悬细胞，之后室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清；

7） 重复步骤6）；

8） 用0.5 ml新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞，即可进行后续的流式分析。注意：请马上进行流式定量分析，此细节很重要。

数据分析：含有红色JC-1聚集物的健康细胞线粒体用FL2通道检测；含有绿色JC-1单体的凋亡或不健康细胞用FL1(FITC)通道检测。

3. JC-1染色步骤（荧光显微镜）

A． 悬浮细胞

1）-6）同上JC-1染色步骤（流式细胞仪）；

7）用0.3 ml的缓冲液重悬细胞，即可进行荧光显微镜检测。注意：请马上进行荧光显微分析，此细节重要。数据分析：使用可同时检测荧光素fluorescein/罗丹明或者荧光素fluorescein/Texas RedTM的双带带通滤波器进行检测。未凋亡的活细胞因JC-1聚集后线粒体呈红色，最大发射波长为590 nm。凋亡和坏死细胞染料一直以单体形式存在，线粒体呈现绿色。最大发射波长为530 nm。

B． 贴壁细胞

1）培养皿内用盖玻片进行细胞爬片或者细胞培养在腔室玻片（chamber slide）上。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。

2）染色前开始配制JC-1工作液，配制步骤见上。

3） 吸掉细胞培养液，然后加入足够覆盖所有细胞的JC-1工作液。于37℃，5%CO2培养箱孵育15-30 min；注意：一般情况，15 min足以进行充分的染色。

4）吸掉培养液，然后用合适的缓冲液来清洗细胞2次。

5）加入2ml细胞培养液（培养液可含有血清和酚红）或者PBS缓冲液，于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下观察。数据分析同A.悬浮细胞。

4. JC-1染色步骤（荧光酶标仪）

1） -7）同上JC-1染色步骤（流式细胞仪）；

9） 用300 μl缓冲液重悬细胞；然后按照每孔100 μl的量将染色好的细胞转移到黑色的96孔板内，即可进行荧光酶标板分析。注意：请马上进行荧光显微分析，此细节重要。

数据分析：健康细胞内，JC-1单体聚集形成聚合物，线粒体呈现强烈的红色荧光（激发波长550 nm, 发射波长600 nm）。凋亡或坏死细胞内JC-1以单体形式存在，线粒体呈强烈的绿色荧光（激发波长485 nm, 发射波长535nm）。然后计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值，用来判断细胞健康程度。

注意事项

1) JC-1是光敏感性的，所有染色步骤的操作过程中避免强光接触。

2) JC-1染色完成后，立即进行后续的结果分析非常必要；

3) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

JC-1 线粒体膜电位荧光探针yb-axbz-228 小鼠脑瘤细胞 BC3H1 规格25毫升/株.
yb-axbz-229 大鼠小肠隐窝上皮细胞 IEC-6 规格25毫升/株.
yb-axbz-230 猪肾细胞 LLC-PK1 规格25毫升/株.
yb-axbz-231 小鼠胚胎成纤维细胞 3T6-Swiss albino 规格25毫升/株.
yb-axbz-232 小鼠成纤维细胞 C3H 10T1/2 2A6 规格25毫升/株.
yb-axbz-233 小鼠树突状细胞肉瘤细胞 DCS 规格25毫升/株.
yb-axbz-234 大鼠肝细胞 IAR20 规格25毫升/株.
yb-axbz-235 新生牛眼晶体上皮细胞 NBLE 规格25毫升/株.
yb-axbz-236 新生牛眼Tenon＇s囊成纤维细胞 NBTF 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
yb-axbz-237 兔角膜后基质层成纤维细胞 RCBBF 规格25毫升/株.
yb-axbz-238 兔角膜前基质层成纤维细胞 RCFBF 规格25毫升/株.
yb-axbz-239 大鼠气管上皮细胞 RTE 规格25毫升/株.
yb-axbz-240 兔眼Tenon＇s囊成纤维细胞 RYTF 规格25毫升/株.
yb-axbz-241 小鼠乳腺癌细胞 CCC-Ca761-03 规格25毫升/株.
yb-axbz-242 果子狸肾上皮细胞 Hed68 规格25毫升/株.
yb-axbz-243 大鼠骨骼肌成肌细胞 L6 规格25毫升/株.
yb-axbz-244 小鼠肺腺癌细胞系 LA795 规格25毫升/株.
yb-axbz-245 鼬肺上皮细胞 MV-1-Lu 规格25毫升/株.
yb-axbz-246 兔晶体上皮细胞永生系 N/N1003A（RLE） 规格25毫升/株.
yb-axbz-247 大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞 RBL-1 规格25毫升/株.
yb-axbz-248 小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞 SH2 规格25毫升/株.
yb-axbz-249 小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞 SH3 规格25毫升/株.
yb-axbz-250 仓鼠/小鼠杂交瘤细胞 145-2C11 规格25毫升/株.
yb-axbz-251 小鼠T淋巴细胞 Cl.Ly1+2-/9 规格25毫升/株.
yb-axbz-252 大鼠骨髓瘤细胞 IR983F 规格25毫升/株.
yb-axbz-253 小鼠单核巨噬细胞 J774A.1 规格25毫升/株.
yb-axbz-254 小鼠肾集合管细胞(SV40转化) M-1 规格25毫升/株.
yb-axbz-255 狗肾细胞隆突型 MDCK superdome 规格25毫升/株.
yb-axbz-256 绿色荧光蛋白标记小鼠前胃癌细胞 MFC-GFP 规格25毫升/株.
yb-axbz-257 小鼠肾足细胞 Mouse podocyte 规格25毫升/株.
yb-axbz-258 小鼠子宫颈癌细胞 U14 规格25毫升/株.
yb-axbz-259 绿色荧光蛋白标记小鼠子宫颈癌细胞 U14-GFP 规格25毫升/株.
yb-axbz-260 小鼠浆细胞瘤 MPC-11 规格25毫升/株.
yb-axbz-261 转PYTL基因小鼠睾丸支持细胞 15P-1 规格25毫升/株.
yb-axbz-263 小鼠结肠癌细胞 CT26.WT [CT26WT] 规格25毫升/株.
yb-axbz-264 小鼠网织细胞肉瘤 M5076 规格25毫升/株.
yb-axbz-265 小鼠正常肝细胞 NCTC1469 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
yb-axbz-266 正常小鼠睾丸Leydig细胞 TM3 规格25毫升/株.
yb-axbz-267 正常小鼠睾丸Leydig细胞 TM4 规格25毫升/株.
yb-axbz-268 615小鼠乳腺癌瘤株 Ca759 规格25毫升/株.
yb-axbz-269 615小鼠乳腺癌瘤株 Ca761 规格25毫升/株.