JC-10 线粒体膜电位荧光探针

JC-10 线粒体膜电位荧光探针产品描述

线粒体膜电位荧光探针JC-10是JC-1的升级产品，同样可用于检测线粒体膜电位的变化。因JC-1虽然在许多实验中被广泛应用，但是其水溶性很差，即使在1 μM浓度的条件下，JC-1也会在水的缓冲液中析出。而JC-10具有更好的水溶性，可以在某些需要高浓度染料的实验中替代JC-1。

正常细胞内，JC-10选择性聚集在线粒体基质中形成可逆的红色荧光聚合物（Ex=540 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-10由多聚体转变为单体形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=490 nm, Em=525nm）。JC-10不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。这两种颜色的变化可以用流式细胞仪上的标准滤光器检测到，绿色荧光可用FL1通道分析，红色荧光可用FL2通道分析。除了用于流式细胞术，也可以用于荧光成像和荧光酶标板检测平台。

在一些细胞系中JC-10有着比JC-1更好的表现。不过，JC-10的性能表现极具细胞依赖性特征。

JC-10 线粒体膜电位荧光探针产品性质

化学名称（Chemical name）

5,6 -Dichloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide; Enhanced JC-1;

分子式（Formula）

C25H27Cl2IN4

分子量（Molecular Weight）

583.34

纯度（Purity）

＞95%（HPLC）

外观（Appearance）

红色粉末

溶解性（Solubility）

溶于DMSO

荧光光谱

（Fluorescent spectrum）

单体形式（monomer form）：Ex=490 nm, Em=525 nm

聚合物形式（J-aggregate form）：Ex=540 nm, Em=590 nm

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。粉末-20℃干燥避光保存，至少一年有效。储存液分装成单次使用量，-20℃干燥避光保存，避免反复冻融，约一年有效。

使用方法

1工作液配制：

1）JC-10粉末（5 mg）：直接加2.5 ml DMSO到粉末内，室温颠倒混匀使其充分溶解，即得到2 mg/ml（约3 mM）的储存液。溶液分装成小量储存于-20℃，避光干燥，避免反复冻融。

2）JC-10储存液（1mg in DMSO）：本品是JC-10的DMSO储存液，浓度为2 mg/ml（约3 mM）。使用者需要根据单次用量来分装，-20℃避光干燥，避免反复冻融。



3）工作液配制（现配现用）：将冻存的储存液置于室温充分融化，之后用HHBS（1×Hanks with 20 mM Hepes buffer, pH 7.0）或其他缓冲液（pH 7-8，含0.02% Pluronic® F-127）配制成10-30 µM 1×工作液。涡旋混匀。

注：对于某些细胞，在pH 8情况下可能会阻止JC-10渗透入细胞。

2 JC-1染色步骤（荧光酶标仪）

1）细胞准备

A贴壁细胞：细胞培养过夜使其密度达到2×104~8×104 cells/well/90μl（96孔板）或者5×103~2×104 cells/well/20μl (384孔板)。

B悬浮细胞：离心后重新将细胞悬浮在培养液中1×105~2×105 cells/well/90μl（多聚赖氨酸包被的96孔板）或者 2.5×103~5×104 cells/well/20μl (多聚赖氨酸包被的384孔板)。 实验前800 rpm离心2分钟。注意：不同的细胞系需要根据具体情况优化凋亡实验用的最佳细胞密度。

2）用实验药物（10 µl 10×化合物）处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡（例如，用camptothecin处理Jurkat细胞4-6 h)。空白对照（只有培养基不含细胞）中加入相同量的药物。 注意：药物处理前没有必要清洗细胞。但是，如果药物对血清敏感，可在加入药物前吸掉培养基和血清因子。然后加入等量体积的HBSS溶液到孔内。或者细胞直接培养在无血清培养基内。

3）加入100 µl/孔（96孔板）或25 µl/孔（384孔板）JC-10工作液。

4）37℃，5% CO2孵育15-60 min。具体孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次实验建议优化体系。

5）直接进行荧光变化检测，记录Ex/Em = 500/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光值，然后计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值，用来判断细胞健康程度。

（可选）或者，吸除JC-10工作液，加入100µl /孔（96孔板）或25µl/孔（384孔板）HHBS，再进行后续的荧光酶标仪检测。

3 JC-1染色步骤（荧光显微镜或流式细胞仪）

1）养细胞过夜使其在药物处理以诱导凋亡时的密度为：5×105~1×106 cells/ml。选择实验药物处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡（例如，用camptothecin处理Jurkat细胞4-6 h)。注：进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106 cells/ml，也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。

2）离心，去上清，每管得到1-5×105细胞。

3）用500µl JC-10工作液重悬细胞。

4）室温孵育或37 ℃，5%CO2孵育15-60 min，需避光。具体孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。

5）用荧光显微镜分别观察Ex/Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光变化；或者用流式细胞仪（FL1和FL2通道进行检测）。

（可选）或者，吸除JC-10工作液，加入100µl /孔（96孔板）或25µl/孔（384孔板）HHBS，再进行后续的荧光显微镜检测。

JC-10 线粒体膜电位荧光探针注意事项

1）C-10是光敏感性的，所有染色步骤的操作过程中避免强光接触。

2）C-10染色完成后，立即进行后续的结果分析非常必要；

3）了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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