iFluorTM 647 phalloidin iFluor

iFluorTM 647 phalloidin iFluor™ 647标记鬼笔环肽（远红）背景描述

鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd= 20 nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片、细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000 Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。

鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。

本品为iFluorTM 647标记的鬼笔环肽，具有高亮度和光稳定性，且染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。iFluorTM 647鬼笔环肽染色与用于细胞分析的其他荧光染色完全兼容，包括荧光蛋白、Qdot® 纳米晶体和其他iFluorTM偶联物（包含iFluorTM偶联二抗）。另外，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。

本品以1000×储存液形式（溶于DMSO）提供。

iFluorTM 647 phalloidin iFluor™ 647标记鬼笔环肽（远红）产品性质

分子量（Molecular Weight）

～2200

最大激发/发射波长（Ex/Em）

650/665nm

溶解性（Solubility）

溶于DMSO

结构式（Structure）


运输与保存方法

冰袋运输。收到货后-20℃避光干燥保存，1年有效。

注意事项

1） 鬼笔环肽具有毒性，需小心操作（对人的半数致死剂量LD50约2mg/kg）。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

需要自备材料

1） 1×PBS缓冲液, pH 7.4, 细胞培养级别（货号：60145ES76）

2） 固定液4%多聚甲醛（不含甲醇）（溶于PBS缓冲液）（货号：36314ES60）

3） 透化液Triton X-100（溶于PBS缓冲液）

4） BSA，标准级别（货号：36101ES25）

5） DAPI染液（即用型）（货号：40728ES50）

iFluorTM 647 phalloidin iFluor™ 647标记鬼笔环肽（远红）操作步骤

1. 1×工作液准备

吸取1µl 1000×iFluorTM 647标记鬼笔环肽（溶于DMSO）到1ml 含有1%BSA的PBS缓冲液中即可得到1×工作液。

注：1）使用前需将1000×DMSO iFluorTM 647鬼笔环肽储存液分装并于-20℃避光干燥保存。

2）不同的细胞染色情况不同，相应iFluorTM 647鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

2. 染色步骤

1） 细胞培养过夜或更长，使其密度达到50-60%汇合度。

2） 吸掉培养液，37℃预热的1×PBS（pH 7.4）清洗细胞2次。

3） 使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10-30min。

注意：避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

4） 室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。

5） （可选）：室温条件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化处理3-5min，从而增加其通透性。

6） 室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。

7） 取足够量新鲜配好的 iFluorTM 647标记鬼笔环肽工作液以覆盖住细胞，如：100µl/孔（96孔板），室温避光染色20-90min。

8） 用PBS清洗细胞3次，每次5min。

9） （可选）：加入足量的即用型DAPI溶液对细胞核进行复染，如：100µl/孔（96孔板），室温3~5min。用PBS清洗细胞2次，每次5min。

10）于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择iFluorTM 647激发/发射滤片（Ex/Em=650/665nm）和/或DAPI激发/发射滤片（Ex/Em=364/454nm）。
iFluorTM 647 phalloidin iFluor™ 647标记鬼笔环肽（远红）yb-1388 人真皮成纤维母细胞-胎儿
yb-1389 人真皮成纤维母细胞-新生
yb-1390 人真皮成纤维母细胞-成人
yb-1391 人角膜上皮细胞
yb-1392 人角膜细胞
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yb-1394 人视网膜色素上皮细胞
yb-1395 人晶状体上皮细胞
yb-1396 人虹膜色素上皮细胞
yb-1397 人结膜成纤维细胞
yb-1398 人非色素睫状上皮细胞
yb-1399 人小梁网细胞
yb-1400 人羊膜上皮细胞
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yb-1403 人淋巴内皮细胞
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yb-1405 人颅骨成骨细胞
yb-1406 人滑膜细胞
yb-1407 人髓核细胞
yb-1408 人骨骼肌细胞
yb-1409 人骨骼肌卫星细胞
yb-1410 人骨骼肌成肌细胞
yb-1411 人口腔黏膜角化细胞
yb-1412 人牙龈成纤维细胞
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yb-1418 人乳腺表皮细胞
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yb-1420 人间充质干细胞－骨髓
yb-1421 人间充质干细胞－脂肪
yb-1422 人间充质干细胞－肝
yb-1423 人间充质干细胞－脐带
yb-1424 人脐静脉内皮细胞
yb-1425 人脐动脉内皮细胞
yb-1426 人脐静脉平滑肌细胞
yb-1427 人脐动脉平滑肌细胞
yb-1428 ECV304(人脐静脉内皮细胞株)
yb-1429 PC-12分化（大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤）
yb-1430 PA317（鼠胚胎成纤维细胞）
yb-1431 SP2/0（骨髓瘤细胞）
yb-1432 CHO（中国仓鼠卵巢细胞）
yb-1433 COS-7（SV40转化的非洲绿猴肾细胞）
yb-1434 VERO（非洲绿猴肾细胞）
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