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- GD-NB3070
- 2025年10月30日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
上海古朵生物有限公司
- 检测范围：
科研
- 检测方法：
酶联检测
- 适应物种：
小鼠
- 规格：
48T/96T
颗粒酶BELISA
货号：GD-NB3070
规格:48T/96T
运输条件:2-8℃低温运输，用干冰或者冰袋低温运输。
待检样本:体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等等。
颗粒酶BELISA操作步骤：
1）取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。
2）分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。
3）标准品的稀释：准备小试管6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0 号标准品。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
4）加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
5）温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
6）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒弃去，如此重复5 次，拍干。
7）加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。
8）温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
9）洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15-30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸彻底拍干。
10）显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。
11）终止：25-37℃下避光反应10-15分钟，加入50ul终止液。
12）读板：在450nm波长读取各孔的OD值。
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文献和实验佛波酯（phorbol esters）和钙离子载体诱导的CTL颗粒酶释放分析法 【基本原理】 用佛波酯（phorbol esters）和钙离子载体处理CTL，通过一种TCR复合物非依赖性机制，刺激CTL细胞颗粒酶的胞泌作用。 【试剂及材料】 （1） 1mg/ml十四酰佛波乙酸酯（phorbol myristate acetate，PMA）二甲亚砜溶液。 （2） 1mg/ml钙离子
基本原理 该法通过抗原（靶细胞）刺激CTL的TCR，从而活化CTL。其特点是，可定量测定CTL-靶细胞特异性的相互作用，这种靶细胞诱导的CTL细胞颗粒酶胞泌作用，也可通过测定效应细胞或靶细胞的表面分子作为辅助指标。 试剂及材料 1. 特异性靶细胞，其表面携带CTL所识别的抗原； 2. 其余材料见操作方法 。 操作方法 1. 于96孔细胞培养板中加入50μl完全培养液配制的2×106 /ml CTL悬液，然后加50μl 2×105 靶细胞悬液，作为试验孔；并设颗粒酶
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