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DiO(细胞膜绿色荧光探针)

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  • 2025年07月15日
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      上海信裕

    DiO(细胞膜绿色荧光探针)产品描述
    DiO是一种亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构进入细胞膜后，DiO在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，DiO被激发后可以发出绿色的荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命。可以用标准的 FITC滤光片检测。
    DiO通常不会明显影响细胞的生存力(viability)，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
    产品细节图片1
    图一: DiO和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱
    DiO(细胞膜绿色荧光探针)产品性质
    同义名 DiOC18(3)，DiO perchlorate Cas No. 34215-57-1
    分子式 C53H85ClN2O6 分子量 881.7
    Ex/Em 484/501 nm 推荐滤光器 XF23-Omega, 31001-Chroma
    运输与保存方法
    冰袋（wet ice）运输。产品-20 ºC干燥避光保存，有效期一年。
    使用方法
    1. 染色液制备
    （1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
    注意：未使用的储存液保存在-20℃，分装保存，避免反复冻融。
    （2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
    注意：工作液最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可从推荐浓度的十倍以上找最佳条件。
    2. 悬浮细胞染色
    （1）悬浮细胞密度为 1 × 106/mL加入到工作液中。
    （2）在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
    （3）染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。
    （4）倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。
    （5）重复（3），（4）步骤两次以上。
    3. 粘壁细胞的染色
    （1）使粘壁的细胞在无菌实验室培养。
    （2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
    （3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
    （4）在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
    （5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。
    DiO(细胞膜绿色荧光探针)4. 显微镜检测
    （1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
    （2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
    a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
    b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
    c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005
    5. 流式细胞仪检测
    染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。
    注意事项
    1) 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
    2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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      外观：因为高脂饮食，毛发看起来有些「油腻」。 活动：因 DIO 的肥胖表型，多数小鼠看起来比较「慵懒」，不爱动。 脱毛：因 B6 品系的特性，容易出现理毛导致的脱毛，需关注是否有继发皮肤炎症反应。 运输应激：DIO 小鼠在经历运输后容易出现体重降低的情况。根据友商资料和我们的历史数据，运输后 DIO 平均体重减轻在 10%-15%。一般需要经过 2 周左右的适应性饲养，体重可以恢复到出库水平。 打架现象：因雄鼠的天性问题，可能会出现打架的情况，建议不要将不同笼小鼠进行混装。 B6 小鼠会

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