DiO(细胞膜绿色荧光探针)

（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
注意：工作液最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可从推荐浓度的十倍以上找最佳条件。
2. 悬浮细胞染色
（1）悬浮细胞密度为 1 × 10⁶/mL加入到工作液中。
（2）在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
（3）染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。
（4）倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。
（5）重复（3），（4）步骤两次以上。
3. 粘壁细胞的染色
（1）使粘壁的细胞在无菌实验室培养。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。
DiO(细胞膜绿色荧光探针)4. 显微镜检测
（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
（2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005
5. 流式细胞仪检测
染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。
注意事项
1) 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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