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GST标签蛋白纯化介质

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  • IPE-GST
  • 北京
  • 2025年07月05日
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    琼脂糖亲和介质(谷胱甘肽)产品说明书
    1. 产品简介
    琼脂糖亲和介质(谷胱甘肽)是专门设计用于分离纯化不同来源(如胎盘、肝脏、胞液、大片吸虫、昆虫、血吸虫、玉米螟等)的谷胱甘肽S-转移酶、谷胱甘肽S-转移酶的重组融合蛋白和依赖S-转移酶或谷胱甘肽的蛋白,一步分离即可得到高纯度的目标蛋白,操作条件温和,有利于保持蛋白活性。
    本中心开发的谷胱甘肽亲和介质以琼脂糖凝胶为基质,以谷胱甘肽为配基,具有好的色谱性能,并具有较强的化学和物理稳定性。
    2. 产品特性
    参数
    指标
    基质
    4%交联琼脂糖凝胶
    配基
    谷胱甘肽
    形状
    球形
    介质平均粒径
    90 μm (45~165)
    配基密度
    20~30 GSH/ml wet gel
    动态载量
    10mg GST/ml wet gel
    最高流速(25
    450 cm/h
    最高耐压
    0.3 MPa (3 bar)
    pH稳定性
    3~12(长时间);2~12(短时间)
    化学稳定性
    30%异丙醇、6M盐酸胍、8M尿素
    物理稳定性
    溶液的pH或离子强度影响介质的体积变化率<2%
    保存
    4~8 oC20%乙醇)
    3. 应用
    谷胱甘肽亲和介质的层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。
    平衡:5~10CV的平衡缓冲液(50 mM Tris-HClpH8.0,可添加适当浓度(如0.15M)的NaCl抑制非特异性吸附)平衡层析柱,至流出液电导和pH不变(与平衡液一致)。
    进料:样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制;低浓度样品溶液可用平衡液透析;高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱,样品应经离心或微滤(0.45μm)处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
    淋洗:上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
    洗脱:用洗脱缓冲液(50 mM Tris-HCl+10mM GSHpH8.0GSH浓度需要根据目标蛋白的结合力进行适当调整)洗脱,收集流出液。
    原位清洗:介质使用数次(具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关)后,需要对介质进行在位清洗。
    1)最常用的方法是用0.5MNaOH100cm/h的速度淋洗柱子3-5CV,然后用缓冲液洗到中性即可重复使用;
    2)对疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质,可用5~10 CV70%乙醇或30%异丙醇清洗(20 min以上),并用3~10 CV的纯水冲洗。
    其它注意事项:在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干而导致气泡进入。

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    相关实验
    • 亲和层析

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