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- 2025年07月14日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
苏州为真
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大量
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产品编号
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产品名称
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规格
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WZ-EG250
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MicroDiag EvaGreen定量试剂盒
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250反应
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WZ-EG500
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MicroDiag EvaGreen定量试剂盒
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500反应
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WZ-EG1000
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MicroDiag EvaGreen定量试剂盒
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1000反应
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①. 2 x MicroDiag EvaGreen Master Mix, containing:
PCR Buffer,
3mM MgCl2,
EvaGreen® dye,
HotStar Taq® Plus DNA Polymerase
dNTP mix (dATP, dCTP, dGTP, dTTP),
②．25 mM MgCl2
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EvaGreen Dye: EvaGreen 是 Biotium 公司的DNA 结合染料，它是一种同时适用于实时 PCR 和 高分辨率熔解曲线（ HRM ）分析的新一代染料。这种染料通过一种被称为“按要求释放”的全新机制，选择性的结合双链 DNA 。这一机制保证了较低的 PCR 抑制作用，同时也允许在染料饱和浓度以下进行高分辨率熔解曲线（ HRM ）分析。由于 EvaGreen 染料在光谱特性上类似于 FAM 以及 SYBR Green I ，因此 这种染料兼容所有商业化的 qPCR 仪器。此外，和 SYBR Green I 以及 SYBR GreenER 不同的是， EvaGreen 染料非常稳定且无致突变性和细胞毒性。
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文献和实验发光基团pNA游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1．准备工作： A、 裂解液溶解后混匀，冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备：每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT，冰浴备用。 2．样本处理： A、悬浮细胞 1） 诱导完成后的细胞，2000 rpm离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS轻轻重悬细胞并计数
大家都知道进行绝对定量需要标准曲线，有些用户认为进行相对定量时就不需要标准曲线了，可以通过 2-ΔC'T来计算，但这一计算是有条件的，即所有荧光定量PCR扩增的效率都接近于100%，可以通过实验来证明。但大多数用户并没有进行这样的实验就直接用 2-ΔC'T 来计算了。这是错误的，会得到错误结论。无论是使用自配的试剂还是用商业的荧光定量试剂盒，最好买够试剂，以免进行预实验或正式实验时没有试剂而必需采用其他试剂，由于不同试剂的缓冲液成份有较大差别，如有的试剂中含有DMSO及Mg2+离子等，可能会
蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功，或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存，需对细胞裂解液进行蛋白定量；为了判定蛋白的产量，需对纯化好的蛋白进行定量；为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记，同样需首先对蛋白样品进行定量，以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。现今有很多商品化的蛋白定量试剂盒，如BCA定量试剂盒等，操作起来，简便快捷。当然也有不少实验室，还是采用传统的方法进行蛋白定量。现将蛋白定量过程中所遇的一些问题小结一下。Q1: 采用考马斯亮蓝G5-20
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