荧光定量试剂盒，SYRB GREEN

高性能Realtime PCR Master Mix Realtime PCR Master Mix系列

产品内容

【QPK-101,QPK-201】
Master Mix1ml ×5支
(50μl反应200次份、20μl反应500次份)

【QPK-212】
Master Mix1ml ×5支
Plus solution1ml ×1支
(50μl反应200次份、20μl反应500次份)

注意事项

关于PCR相关产品的标签许可事项，请浏览本公司的网站(www.bio-toyobo.cn) [PCR相关产品角]。

基本反应条件

〈SYBR^® Green I 法〉
灭菌水Xμl
Master Mix25μl
各Primer10pmoles each～
DNA样品Yμl

Total Volume50μl

Cycle
95℃ 60sec.
↓
95℃ 15sec.
55～65℃ 15sec. 40cycles
72℃ 45sec.
※退火温度，请根据引物的Tm在55～65℃之间进行调整。
※延伸反应时间，只要扩增长度在200bp左右，设定为45sec就可以。

备注

LightCycler^® 是Idaho Technology Inc.的商标。
SYBR^® 是Molecular Probes Inc.的注册商标。
TaqMan^® 是Roche Molecular Systems Inc.的注册商标。
ABI PRISM^® 是Applied Biosystems Inc.的注册商标。

用途

Realtime PCR

说明

本产品是在 Taq DNA polymerase 基础上开发的通用性很高的Realtime PCR 用 2×浓度的预混液。可获得重复性良好的结果。
各试剂分别按以下所示进行使用。

产品名	用途	是否有passive reference校正	是否可用于玻璃毛细管	能否用于一步法RT-PCR*	可靠性
Realtime PCR Master Mix	探针法**	有	可	可	☆☆☆
SYBR® Green Realtime PCR Master Mix	SYBR® Green法	有	可	可	☆☆☆
SYBR® Green Realtime PCR Master Mix -Plus-	SYBR® Green法	有	可	不可	☆☆☆☆

*逆转录酶「ReverTra Ace^®」[Code No. TRT-101]与RNase inhibitor [Code No. SIN-201] 组合，就可以进行one-step PCR。
**可用于TaqMan^® probe分析法及Hybridization probe分析法等。

特征

●高特异性
为了抑制非特异性反应，本产品采用了抗Taq聚合酶抗体的热启动法。


●适用于各种用途
可用于探针分析法及SYBR^® Green I分析法。


●适用于各类仪器
产品中还添加了 Passive Reference，可应用于需要校正的仪器（Applied Biosystems^®、StepOnePlus^TM等）。
还可用于使用玻璃毛细管类型的检测仪器（Roche Diagnostics公司的LightCycler^®等）。


●提高了可靠性 [SYBR^® Green Realtime PCR Master Mix -Plus-(QPK-212)]
通过对组分的最优化，抑制了SYBR^® Green 分析时引物二聚体等问题的产生，提高了可靠性和重复性。


●使用了高纯度Taq DNA polymerase
PCR的基本性能得到了改善。

实验例

1. SYBR^® Green 分析体系与其他公司产品的反应性能比较
本例将SYBR^® Green 分析体系与其他公司产品的反应性能进行了比较。首先将人的基因组DNA各作10倍梯度稀释（从30ng到3pg的5个梯度），以稀释液为样品进行PCR，扩增β-actin基因。结果显示，使用本产品时，在扩增效率及起峰早晚方面有显著优势。另外，引物二聚体的产生也不明显。

（仪器：使用BioFlux公司的LineGene）

2. 相关性分析的讨论
使用本公司的逆转录试剂盒ReverTra Ace -α-^®，以HeLa细胞来源的Total RNA(100ng)为模板，使用random primer合成1st strand cDNA之后，稀释10倍后作为标准品，各作5倍梯度稀释，检测β-actin基因。结果显示，所有浓度都得到了良好的扩增曲线。

（使用Roche公司的LightCycler^TM）

3. 与其他公司产品性能的比较【相关性】
啮齿类动物来源的基因组DNA（以10倍稀释系列：10ng、1ng、0.1ng、0.01ng(n=2)）为模板，通过相关性分析进行目的基因（约80bp）的检测。结果显示，A公司的试剂产生了非特异性扩增及引物二聚体，但用SYBR^® Green Realtime PCR Master Mix -Plus-却得到了良好的扩增。另外，Ct值的间隔也是相等的，可定量扩增区域也非常广。

（仪器：使用BioFlux公司的LineGene）

4. TaqMan^® 法的应用
使用本公司的逆转录试剂盒ReverTra Ace -α-^®，以HeLa细胞来源的Total RNA(100ng)为模板，使用random primer合成1st strand cDNA之后，稀释10倍后作为标准品，各作5倍梯度稀释，使用Applied Biosystems公司的Pre-Developed TaqMan^® Assay Reagents对β-actin进行TaqMan^®法检测。结果显示，所有浓度都得到了良好的扩增曲线。没有扩增的曲线是空白对照（蒸馏水）。

（仪器:使用ABI PRISM^® 7700）