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- 详细信息
- 用户评价
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
2x Realab Green PCR Fast mixture
- 保质期：
2年
- 供应商：
兰博利德（LABLEAD）
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
2500次(25*1 ml)/1000次(10*1ml)/500次(5*1ml)/100次(1ml)
| 规格： | 2500次(25*1 ml) | 产品价格： | ￥2800.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 1000次(10*1ml) | 产品价格： | ￥1350.0 |
| 规格： | 500次(5*1ml) | 产品价格： | ￥750.0 |
| 规格： | 100次(1ml) | 产品价格： | ￥170.0 |
产品货号：R0202
储存条件：长期保存请于 -20℃避光保存，Mix 融解后可在 4℃避光条件下稳定存放一个月，尽量避免反复冻融。
产品简介
Taq SYBR® Green qPCR Premix 是 SYBR® Green I 嵌合染料法专用qPCR试剂，为2×预混液，包含除引物和DNA样品以外的所有qPCR组分，可减少操作步骤，缩短加样时间，降低污染几率。其核心组分是经抗体修饰的热启动Taq DNA聚合酶，配合精心优化的Buffer体系以及PCR反应促进因子，使产品具有特异性强、扩增效率高等特点，有效抑制非特异性扩增，可对宽广浓度范围的模板进行准确定量，获得稳定可靠的qPCR结果。
使用方法
1.适配机型
全机型通用
2.使用注意
① 因Mix中预混有染料，其保存或反应体系配制过程应避免强光照射；
② 使用前上下颠倒轻轻混匀Mix，请勿涡旋振荡混匀，避免产生过多气泡。
3.建议的qPCR反应体系
|
试剂 |
使用量 |
终浓度 |
|
Taq SYBR® Green qPCR Premix |
10ul |
1× |
|
正向引物 (10uM)a |
0.4ul |
0.2uM |
|
反向引物(10uM)a |
0.4ul |
0.2uM |
|
DNA模板b |
X ul |
10~200 ng/20ul |
|
Nuclease-Free Water |
To 20ul |
a.调通推荐的引物终浓度为0.2uM，反应效果不佳时可在0.1~1uM范围内进行调整;
b.推荐模板加样量的为1~2ul，如模板类型为未稀释cDNA原液，模板添加量不应超过总反应体系的10%，不同种类DNA模板中含有的靶基因拷贝数目不同，必要时可进行梯度稀释，以确定必要的DNA模板添加量。
4.qPCR 反应程序（可根据机型适当调整）
两步法：
三步法：
a.根据引物的Tm值进行退火&延伸（退火）温度的设定；若扩增片段在200bp以内，退火&延伸（延伸）时间可以设置为15sec;此外，退火&延伸（延伸）时间的设置还需根据您使用的qPCR仪所需的最短数据采集时间自行调整；
b.不同 qPCR 仪的熔解曲线采集程序有差别，一般可使用仪器默认的熔解曲线采集程序。
5.实验优化
若使用默认反应条件反应性能不佳时，则需要进行反应条件的优化，可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行：
① 引物浓度调整
当引物终浓度在0.1~1.0uM范围之间变化时，引物浓度越低，扩增特异性越高，但扩增效率会有所下降。
② 扩增程序优化
需提高扩增特异性，可使用两步法程序或提高退火温度；需提高扩增效率，可使用三步法程序或延长延伸时间。
6.引物设计原则
① 扩增产物长度建议控制在80~200bp；
② 引物长度为18~25bp；
③ 正向引物和反向引物的Tm值相差不超过 1℃为佳，Tm值控制在58~62℃为佳；
④ 引物的GC含量控制在 40%~60% 之间；
⑤ 引物A、G、C、T整体分布尽量要均匀，避开T/C或者A/G的连续结构（特别是3'端）；
⑥ 引物3'端最后一个碱基最好为G或者C；
⑦ 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列；
⑧ 使用NCBI BLAST功能检索确认引物的特异性。
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