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- 详细信息
- 用户评价
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
2x Realab Green PCR Fast mixture
- 保质期：
2年
- 供应商：
兰博利德（LABLEAD）
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
2500次(25*1 ml)/1000次(10*1ml)/500次(5*1ml)/100次(1ml)
| 规格： | 2500次(25*1 ml) | 产品价格： | ￥2800.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 1000次(10*1ml) | 产品价格： | ￥1350.0 |
| 规格： | 500次(5*1ml) | 产品价格： | ￥750.0 |
| 规格： | 100次(1ml) | 产品价格： | ￥170.0 |
产品货号：R0202
储存条件：长期保存请于 -20℃避光保存，Mix 融解后可在 4℃避光条件下稳定存放一个月，尽量避免反复冻融。
产品简介
Taq SYBR® Green qPCR Premix 是 SYBR® Green I 嵌合染料法专用qPCR试剂，为2×预混液，包含除引物和DNA样品以外的所有qPCR组分，可减少操作步骤，缩短加样时间，降低污染几率。其核心组分是经抗体修饰的热启动Taq DNA聚合酶，配合精心优化的Buffer体系以及PCR反应促进因子，使产品具有特异性强、扩增效率高等特点，有效抑制非特异性扩增，可对宽广浓度范围的模板进行准确定量，获得稳定可靠的qPCR结果。
使用方法
1.适配机型
全机型通用
2.使用注意
① 因Mix中预混有染料，其保存或反应体系配制过程应避免强光照射；
② 使用前上下颠倒轻轻混匀Mix，请勿涡旋振荡混匀，避免产生过多气泡。
3.建议的qPCR反应体系
|
试剂 |
使用量 |
终浓度 |
|
Taq SYBR® Green qPCR Premix |
10ul |
1× |
|
正向引物 (10uM)a |
0.4ul |
0.2uM |
|
反向引物(10uM)a |
0.4ul |
0.2uM |
|
DNA模板b |
X ul |
10~200 ng/20ul |
|
Nuclease-Free Water |
To 20ul |
a.调通推荐的引物终浓度为0.2uM，反应效果不佳时可在0.1~1uM范围内进行调整;
b.推荐模板加样量的为1~2ul，如模板类型为未稀释cDNA原液，模板添加量不应超过总反应体系的10%，不同种类DNA模板中含有的靶基因拷贝数目不同，必要时可进行梯度稀释，以确定必要的DNA模板添加量。
4.qPCR 反应程序（可根据机型适当调整）
两步法：
三步法：
a.根据引物的Tm值进行退火&延伸（退火）温度的设定；若扩增片段在200bp以内，退火&延伸（延伸）时间可以设置为15sec;此外，退火&延伸（延伸）时间的设置还需根据您使用的qPCR仪所需的最短数据采集时间自行调整；
b.不同 qPCR 仪的熔解曲线采集程序有差别，一般可使用仪器默认的熔解曲线采集程序。
5.实验优化
若使用默认反应条件反应性能不佳时，则需要进行反应条件的优化，可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行：
① 引物浓度调整
当引物终浓度在0.1~1.0uM范围之间变化时，引物浓度越低，扩增特异性越高，但扩增效率会有所下降。
② 扩增程序优化
需提高扩增特异性，可使用两步法程序或提高退火温度；需提高扩增效率，可使用三步法程序或延长延伸时间。
6.引物设计原则
① 扩增产物长度建议控制在80~200bp；
② 引物长度为18~25bp；
③ 正向引物和反向引物的Tm值相差不超过 1℃为佳，Tm值控制在58~62℃为佳；
④ 引物的GC含量控制在 40%~60% 之间；
⑤ 引物A、G、C、T整体分布尽量要均匀，避开T/C或者A/G的连续结构（特别是3'端）；
⑥ 引物3'端最后一个碱基最好为G或者C；
⑦ 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列；
⑧ 使用NCBI BLAST功能检索确认引物的特异性。
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volume ) 624μl Analysis (on the ABI7500 Fast Real-Time PCR System in Dr. Steve Young’s Lab) 1.) Sign up online at http://calendar.yahoo.com with login “younglabqpcr” and password “7500abi”.2.) Bring your plate up to MRL 4629. The ABI machine
mixture in each optical tube. 25 ml SYBR Green Mix (2x) 0.5 ml liver cDNA 2 ml primer pair mix (5 pmol/ml each primer) 22.5 ml H2 O OR 12.5 ml SYBR Green Mix (2x) 0.2 ml liver cDNA
of organism (cow, frog, snail, beetle, worm or fungi). Problems may arise if you try to catch the fast evolving genes. If not, you are pretty sure to find what you are looking for by using degenerate PCR. The case may be a bit harder if you look for genes
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