平板克隆形成实验服务

平板克隆形成实验

平板克隆形成实验形成项目介绍：
当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，称为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力，各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变，通过计数克隆形成率可对单个细胞的增殖潜力做定量分析，了解细胞的增殖能力和独立生存能力。软琼脂培养或平板克隆是最长用的方法。
平板克隆形成实验形成实验流程：
调整细胞状态→制备单细胞悬液→按不同的细胞浓度梯度把细胞均匀接种于培养平板→培养10-14天→观察克隆情况，Giemsa染色后计算克隆形成率

平板克隆形成实验可以检测贴壁细胞的克隆形成能力，克隆形成试验可反映细胞群体依赖性和增殖能力。一般细胞在体外增殖六代以上，其后代形成的细胞群体称为细胞集落或克隆。每个克隆由单一细胞而来，含有50个以上细胞大小在0.3-1mm之间。通过克隆形成可检测各种理化因素对细胞克隆形成能力的影响。

平板克隆形成实验基本步骤:

1.取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞并把细胞县浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中衡用。

2.将细胞县液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种合10mL 37"C预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37C、5% CO₂及饱和温度的细胞培养箱中培养2-3周。

3.经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加甲醛固定细胞5ml固定15分钟。然后安固定液加适量GIMSA应用染色液染10-30分钟然后用流水缓慢洗去染色源，空气干燥。

4.将平皿倒置并叠加一张带网格的适明胶片，用肉眼直接计数克隆或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数，再计算克隆形成率，克隆形成率=克隆数/接种细胞数。

服务流程:

1)项目方案的确定，包括目的细胞、 细胞处理方式及处理时间等；

2)细胞培养；

3)克隆形成实验；

4)克隆形成实验图片及实验报告。