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- 英茂盛业
- VL3311
- 2025年07月16日
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pLV-EF1a-EGFP-N Cat. No. VL3311
载体特性
类型：慢病毒基因过表达载体
基因启动子：EF1a promoter
荧光标签：EGFP
真核细胞筛选抗性：Puromycin
原核抗性：Ampicillin
pLV-EF1a-EGFP-N载体是基于HIV1的慢病毒基因过表达载体。该载体的多克隆位点位于EGFP基因上游，在EF1a启动子驱动下表达目的基因和EGFP融合蛋白。EF1a启动子来自人类EEF1A基因，可在多数种类细胞中稳定表达，尤其是某些CMV启动子会发生沉默的细胞如干细胞等。PGK启动子驱动表达Puromycin抗性基因。利用本载体包装的慢病毒将表达Puromycin抗性基因，可以方便地使用Puromycin筛选出稳定过表达目的基因的细胞。同时表达带有EGFP荧光标签的目的基因，可以很容易的对病毒感染效率以及目的基因的表达和定位进行监测。
pLV-EF1a-EGFP-N载体包含了生产慢病毒所必须的病毒原件以及提高病毒滴度及基因表达效率的原件。载体结构紧凑，在保证产生高滴度病毒的同时，载体对外源基因片段的容量达到3kb，多数哺乳动物基因都可以在pLV-EF1a-EGFP-N中成功表达。
使用说明
pLV-EF1a-EGFP-N载体用于在包括原代培养细胞在内的各种哺乳动物细胞中稳定表达外源基因和Puromycin抗性基因。pLV-EF1a-EGFP-N载体与包装载体共转染HEK293T细胞后（包装体系货号KLV3501和KLV3502），产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒，可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。
原核培养特性
pLV-EF1a-EGFP-N载体为高拷贝质粒，带有氨苄抗性基因，可以在含有100 μg/ml氨苄抗生素的LB培养基中增殖。
宿主菌可以采用DH5α，JM109，TOP10等常见大肠杆菌菌种。
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文献和实验naj2007 请教一下各位老师，在构建过表达载体的时候，VEGF和GFP是不是不可以做成融合蛋白，但是如果用不同的启动子的话，很容易丢失荧光，有没有什么解决方法。 zhujoker 可以做成融合蛋白的，即使是使用不同的启动子的话荧光也不那么容易丢失的，大不了你将荧光的启动子换成强的如CMV，EF1a之类。 kinguangjun 或者你可以用CMV-VEGF-IRES-GFP来做
【求助】【求助】将病毒载体感染细胞只有部分基因表达为什么，什么方法可以探究基因未表达的原因
beingconfident 最近做慢病毒感染细胞，慢病毒载体是自己包装的，含有筛选基因，marker基因，还有目的基因。第一次做筛选基因是G418，但是可见部分细胞表达marker基因，但是加药筛选不死，最后检测目的基因有表达。很奇怪。后来重做将筛选基因换成Hygromycin，感染48h小时加药，细胞死亡明显，最后形成单克隆，但是没有看到marker基因的表达，测目的基因有表达，两次结果都有些戏剧性。 总结起来我的问题就是明明导入了三个基因
本人持有以下载体及基因：（原则上只交换不赠送，欢迎广大站友互通有无） QQ 2283524599 luckamily@126.com 一、载体 1)、miRNA载体 Promega miRNA靶标克隆载体 psiCHECK-2 psiCHECK2 amp Ambion miRNA靶标克隆载体 pmiR-report pmiRreport amp Invitrogen miRNA过表达载体 PCDNA TM 6.2-GW/EmGFP-miR
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
