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蛋白内切酶 GluC

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    ■  通过质谱进行蛋白质组学分析的理想用酶
    ■  可用于蛋白和多肽的鉴定
    ■  从蛋白酶缺陷型枯草芽孢杆菌中表达，无其它蛋白酶污染


    概述
    蛋白内切酶 GluC（又称金黄色葡萄菌 V8 蛋白酶）是丝氨酸蛋白酶，能选择性切割谷氨酸残基的 C 端肽键（1），同时也能够切割天冬氨酸残基，但其反应速率要比前者慢 100-300 倍（2，3）。


    来源
    克隆有金黄色葡萄球菌 V8 蛋白酶基因的枯草芽胞杆菌。


    反应条件
    1X GluC 反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl，0.5 mM Glu-Glu（pH 8.0 @ 25 ℃）]，25 ℃ 温育。


    随酶提供的试剂
    1X GluC 反应缓冲液


    比活性
    ~38.3 μmol/min/mg。


    分子量
    29,849 Da。


    重溶
    用 50-500 μl 的高纯度水溶解。快速自裂解效率随酶浓度不同而异。


    贮存条件
    本品以冻干粉形式提供，冻干粉从含磷酸钾和氯化钠的缓冲液中干燥而来。于 -20 ℃ 保存。
    以液态形式于 -20 ℃ 可保存 2 周，但液态形式保存会降低其活性。欲达到最佳效果，请使用新鲜重溶的蛋白酶。


    参考文献
    (1) Drapeau G.R., Boily, Y. and Houmard, J. (1972) J. Biol.Chem ., 247, 6720–6726.
    (2) Benner, J.S., Martin, D. and Schampel, A.K., New England Biolabs, Inc., unpublished results.
    (3) Birktoft J.J. and Breddam, K. (1994). In A.J. Barrett (Ed.),Methods in Enzymology , Vol. 244, (pp.114–126).San Diego: Academic Press.
    (4) Breddam K. and Meldal, M. (1992) Eur. J. Biochem .,206, 103–107.


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          Alphabetic List of Commercial Isoschizomers and Corresponding Fermentas Restriction Endonucleases Information on commercially available restriction endonucleases is from: Roberts, R.J. and Macelis, D., Nucleic Acids Res

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      工作仍在继续。人们从分析细胞提取物的生化角度研究的同时，也采用计算机分析已知的基因组数据，以期有更多的发现。尽管很多新发现的酶的识别序列与已有的重复--即同裂酶，仍然有识别新位点的酶不断被发现。 上世纪80年代，NEB开始克隆并表达限制性内切酶。克隆技术由于将限制性内切酶的表达与原有细胞环境分离开来，避免了原细胞中其它内切酶的污染，从而提高了酶的纯度。此外，克隆技术提高了限制性内切酶的产量，简化了纯化过程，使得生产成本显著降低;克隆的基因很容易进行测序分析，表达出的蛋白也能进行X射线

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