绿豆核酸酶

♦  除去 DNA 或 RNA 分子的 3' 或 5' 突出末端，形成可以用连接酶连接的平齐末端

♦  构建转录图谱

♦  切割发夹结构中的 loop 环

♦  从基因组 DNA 中切除基因编码序列

♦  产生新的限制性酶切位点（如图）

 

 

 

 

 

 

 

 A) 分子量标准(λDNA/HindIII消化)
 B) M13mp8(超螺旋形式)
 C) M13mp8/NcoI消化
 D) M13mp8/HindIII消化
 E) 绿豆核酸酶处理D泳道产物
 F) E泳道产物加入T4 DNA连接酶
 G) NcoI消化F泳道产物
 H) HindIII消化F泳道产物

本品是一种单链DNA或RNA特异性的内切酶，可以从DNA或RNA分子的末端降解单链突出粘端，产生可连接的平末端。

绿豆芽。

1X 绿豆核酸酶反应缓冲液 [50 mM NaAc（pH 5.0 @ 25 ℃），30 mM NaCl，1 mM ZnSO4]，30 ℃ 温育。在NEBuffers 1、2、4 中也有活性。

无双链外切酶污染。

1 单位指 30 ℃ 条件下，1 分钟产生 1 μg 酸溶性总核苷酸所需要的酶量。

1X 绿豆核酸酶反应缓冲液，以0.5 mg/ml 变性的小牛胸腺DNA作底物。

10,000 units/ml

10 mM NaAc (pH 5.0 @ 25°C), 0.1 mM ZnAc, 1 mM cysteine, 0.001% Triton-X 100 和 50% 甘油。-20°C 贮存。

不要尝试热失活。在该酶热失活前，DNA 会发生“呼吸”作用，从而导致降解。

(1) Kowalski, D. et al. (1976) Biochemistr y, 15, 4457–4463.
(2) McCutchan, T.F. et al. (1984) Science , 225, 626–628.

M13mp8 polylinker克隆区所含序列：

5´...CCAAGCTTGG...3´
3´...GGTTCGAACC...5´

用HindIII进行消化

5´...CCA AGCTTGG...3´
3´...GGTTCGA ACC...5´

加入绿豆核酸酶(除去5´突出端）

5´...CCA TGG...3´
3´...GGT ACC...5´

加T4 DNA连接酶

5´...CCATGG...3´
3´...GGTACC...5´

产生新的NcoI（NEB #R0193）酶切位点