葡聚糖酶检测底物

【原创】暗室实验（化学发光底物检测方法）及Western Blot实验优化方法

暗室实验 暗室实验的操作流程： 1. 新鲜配制1-2ml工作液（A液与B液1:1或1:40混合配制） 2. 进入暗室，在黑暗的条件下，加入1μl未稀释的二抗（HRP连接物） 3. 混合后，可立即在暗室中观察到蓝色光 暗室实验的注意事项： ? 工作液按正确比例混合，且新鲜配制 ? 在暗室中加入二抗 ? 直接使用未稀释的二抗 ? 加入二抗后，立即观察 注：暗室实验可同时检测底物是否有活性，以及二抗是否有活性。 如果暗室实验结果阴性： 更换其它二抗，再次进行检测

以4-MU（四甲基伞形酮）为底物定量检测ß-半乳糖

1 应用说明 编码β-半乳糖苷酶(Gal)的基因已商业化地运用到报告基因研究的各种层面，重组的β-Gal已得到成熟的运用，以此用来研究启动子的功能、组织特异性表达、发育调控、mRNA的稳定性以及各种细胞器靶向蛋白的信号序列。应用β-Gal来测定启动子和基因的活性具有双重优点；检测方法简单，用于酶活性分析的底物容易获得，使用TBS-380微型荧光计对溶液中β-Gal活性进行检测

IPTG 诱导蛋白表达实验

℃ 继续培养3 -5h ;如果表达载体的原核启动子为tac 等,则37 ℃培养细菌数小时达到对数生长期后加IPTG 至终浓度为1 mmol / L.继续培养3 -5h . ( 5 )取上述培养液1 mL , 1000g 离心,1 min ,沉淀,加100 μL 聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后,作SDS -PAGE 检测. 2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白质纯化： 细菌的裂解 常用方法有：① 高温珠磨法;② 高压匀浆;③ 超声破碎法;④ 酶溶法;⑤ 化学