Megazyme葡聚糖酶（纤维素酶）检测底物使用说明书

产品信息----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

产品名称：Megazyme葡聚糖酶（纤维素酶）检测底物                                    品牌：Megazyme
货号：K-XYLOSE（100次）                                                                                英文名：Irish Megazyme glucanase (cellulase) assay substrate
供应商：北京中检葆泰生物技术有限公司                                                           
保质期：一年                                                                                                      保存条件：冷藏

产品简介--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

葡聚糖是一类非淀粉多糖，由β -1,3 和 / 或β -1,4 糖苷键连接的 D 型葡聚糖聚合物是 谷物类细胞壁的主要成分之一，约占其干质量的 5.5%， 也广泛存在于褐藻、酵母、大型真菌、细菌等其他微 生物的细胞壁中。高分子质量的β- 葡聚糖分子间及分 子内的相互作用较强且不够稳定，因而常呈黏性。 β - 葡聚糖酶属于水解酶类，水解β - 葡聚糖的β -1,3 和 / 或β-1,4 糖苷键，目前广泛应用于食品、植物病害 防治、饲料、生物质能源、造纸、纺织、医药等行 业。如，在糖化过程中可减轻或消除高分子质量β- 葡 聚糖引起的过滤困难和啤酒中的凝胶沉淀，增加低分子 质量β- 葡聚糖在啤酒中的含量，以提高啤酒的产量和 品质；在食品焙烤业，可缩减面团醒发时间，增大面 团体积；在植物防病害方面，可用于攻击致病性真菌 菌丝壁上的葡聚糖，抑制其生长，也可开发β- 葡聚 糖酶产生菌作为植物保护的生物农药；在饲料中添加 β- 葡聚糖酶可降低单胃动物消化道中食物的黏度，提 高动物对营养物质的消化利用率；用于功能性食品[5]， β- 葡聚糖的酶解产物具有抗肿瘤、抗氧化活性；中 性β- 葡聚糖酶可应用于生物学脱墨处理和提升回收利用 纸浆的特性方面等。

产品性能--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
 

1. 特异性：所有形式的β-木糖脱氢酶均可作用于D-葡萄糖。当D-葡萄糖的浓度与D-木糖浓度相近时，酶的反应速度会降低。然而，当D-葡萄糖浓度很高时，反应速率异常，这样会影响D-木糖的检测。因此当样品中D-葡萄糖的浓度较高，但需测定D-木糖时（小麦面粉酸水解后的糖混合物），应去除葡萄糖。在当前的分析方法中，可以通过在过量ATP存在时用己糖激酶对样品提取物进行短暂的预孵育实现。β-木糖脱氢酶不会作用于L-阿拉伯糖。
2. 灵敏度：0.010个吸光度单位，这相当于当样品体积为2.00 mL时，D-木糖在样品溶液中浓度为0.350 mg/L（或相当于样品体积为0.1mL时，D-木糖在样品溶液中浓度为7.01 mg/L）。
3. 检测限：0.701 mg/L（在样品体积为2.00 mL，吸光度差异为0.020时得到）。
4. 检测范围：线性检测范围为2-100ug D-木糖，同一样品分别进行两次测定,其吸光度值会有0.005-0.010吸光度单位的变化，这相当于样品体积为2.00 mL时，样品溶液中D-木糖浓度0.175-0.350 mg/L。如果样品是经过稀释的，结果计算时应乘以相应的稀释倍数(F)，如果在样品制备阶段称重，如10g/L，可能会产生0.02-0.05g/100g的差异。

产品原理-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

该方法用于特异性检测纤维素酶制剂中的葡聚糖酶（内切纤维素酶）。孵育染色的纤维素和纤维素酶，底物通过内部作用被解聚产生低分子量的染色片段，之后在反应混合物中加入沉降剂，通过离心方法去除大分子量物质，测定上清液的颜色，参照标准曲线可以确定分析溶液中的内切纤维素酶。

产品底物-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
底物采用的是部分解聚的染色的羧甲基纤维素-4M，用蓝色染料R染色多聚糖，大约1个染料分子连接20个糖基。

产品溶解-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

将2g粉状底物加入到带加热板和磁力搅拌棒搅拌的80mL剧烈沸腾的水中，之后关闭加热板，继续搅拌直到溶液/浆液匀质（大约20分钟），再加入5mL乙酸钠缓冲液（2M，pH4.5），冷却溶液到室温。调节pH为4.5，定容到100mL。该溶液可以储存在4℃下，在此条件下，并且不被内切纤维素酶污染时，该溶液可以稳定保存至少12个月。下次使用前，剧烈震荡储存瓶子将底物溶液混合。该溶液是粘性的，应用容积式移液器移取（如Eppendorf Multipette® with a 5.0 mL Combitip）。
沉淀剂溶液
用150mL去离子水溶解40g三水乙酸钠和4g乙酸锌，用5MHCL溶液调节pH值到5.0，用去离子水定容到200mL。将这200mL溶液加到800mL工业甲基化酒精（IMS, 95 %）或酒精（95 %）中，混合均匀，用密封良好的瓶子储存在室温条件下。

产品品牌-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

爱尔兰Megazyme公司是全球知名的酶及酶法分析试剂盒的生产厂家，其中大多数产品都被AOAC(Association of Official Analytical Chemists)、AACC(American Association of Cereal Chemists)、ICC(International Association for Cereal Science and Technology)、 EBC(European Brewing Convention)、RACI(Royal Australian Chemical Institute)等国际组织采用。其中欧洲检测果汁及葡萄酒等发酵产品基本都采用该公司产 品。